钙离子和钙结合蛋白在颞叶癫痫大鼠海马神经元中的动态变化研究神经病学专业论文.docxVIP

中文摘要前言： 中文摘要 前言： 颞叶癫痫是由于颞叶神经元异常放电所致的人类常见的癫痫类 型之一，易成为难治性癫痫。其发病机制尚不明确。钙离子细胞内流 是癫痫发作的基本条件，癫痫发作中存在神经元内钙离子超载现象， 这种异常的钙离子内流是神经元同步化放电的先决条件，同时也能触 发神经元一系列病理生理改变导致神经元损伤和可塑性改变。在不同 的离体和在体癫痫模型中，均发现持续的癫痫样放电或癫痫持续状态 可导致细胞内钙离子的浓度升高，在癫痫持续状态和癫痫样放电活动 停止后，细胞内钙离子水平仍持续升高。同时，癫痫持续状态可导致 在体匹罗卡品癫痫模型中微粒体钙离子摄取能力的急性和永久性下 降，从而导致钙稳态的改变。迄今，对颞叶癫痫海马神经细胞内C矿 浓度动态变化的研究不多，尚未见联合运用激光扫描共聚焦显微镜和 钙荧光探针Fluo．3／AM研究颞叶癫痫海马神经细胞内Ca2+浓度动态 变化的报道。 有研究认为中间神经元数量的变化可导致大脑皮层环路的改变， 进而诱发癫痫。中间神经元绝大多数以Y．氨基丁酸(GABA)作为 神经递质，因而是抑制性神经元。含钙结合蛋白CB、CR、PV的中 间神经元是GABA能神经元的三个主要亚群，与神经元的发育、一 些刺激诱发的细胞死亡、癫痫、脑缺血和神经变性疾病等关系密切。 现已明确，兴奋性氨基酸与抑制性氨基酸比例失衡，导致兴奋作用增 强，抑制作用减弱，是癫痫发病的重要原因之一。GABA作为中枢神 经系统最具代表性的抑制性神经递质，其浓度的变化在神经元兴奋性 经系统最具代表性的抑制性神经递质，其浓度的变化在神经元兴奋性 的改变、异常放电的过程中起着举足轻重的作用。在不同癫痫模型和 患者海马观察含PV、CR、CB中间神经元数量变化的报道已有较多， 但既往的研究着重于颞叶癫痫的始发过程上，而对颞叶癫痫发生后向 自发性复发性发作演变过程中这三种中间神经元变化的研究较少。 目的： 本研究在氯化锂一匹罗卡品诱导的大鼠颞叶癫痫模型的不同时 期，动态观察颞叶癫痫海马神经元内钙离子浓度的变化规律和CB、 CR和PV蛋白质和mRNA在海马CAl、CA3、齿状回表达的变化规 律，以探讨钙离子在颞叶癫痫演变过程中的作用以及含CB、CR、PV 的中问神经元在颢叶癫痫的发生发展和自发性复发性发作形成中的 作用。 方法： 1．模型制作及分组：随机将体重为200+209的6-8周龄健康雄 性SD大鼠252只分为钙离子组(108只)和钙结合蛋白组(144只)， 其中钙离子组分为：实验组(n=63)及对照组(n=45)，钙结合蛋白 组也分为实验组(n=84)和对照组(n=60)。实验组大鼠腹腔注射氯 化锂(LiCI)3mEq／kg(约125mg／kg)，18～20小时后腹腔注射匹罗卡 品(PILO)10mg／kg／次，每30分钟1次，直至致痫大鼠出现痫性发 作；对照组用生理盐水代替匹罗卡品腹腔注射。根据Racine标准判 定癫痫发作程度，动物处死前作脑电图描记。钙离子组选取PILO腹 腔注射后3小时、6小时、12小时、24小时、48小时、7天、15天、 II 30天、60天为研究的时间点，钙结合蛋白组选取PILO腹腔注射后6小时、24小时、7天、15天、30天、60天为研究的时间点。 30天、60天为研究的时间点，钙结合蛋白组选取PILO腹腔注射后6 小时、24小时、7天、15天、30天、60天为研究的时间点。 2．联合运用激光扫描共聚焦显微镜和钙荧光探针Fluo．3／AM检 测不同时间点海马神经细胞内的钙离子浓度。 3．用免疫组化检测不同时间点海马不同区域CB、CR、PV蛋白 质的表达。 4．用逆转录聚合酶链反应(ImPcR)检测不同时问点海马不同 区域CB、CR、PVmRNA的表达。 结果： 1．本实验氯化锂一匹罗卡品颞叶癫痫模型SE诱发成功率为 91．8％，致痫死亡率为14．3％。 2．钙离子测定部分示各癫痫组大鼠海马神经细胞的平均荧光像 素数均明显高于对照组，差异有显著性，p0．01。 3．实验组大鼠海马细胞内的钙离子浓度的变化可分为三个阶段： 第一阶段，即急性期，癫痫组细胞内钙离子浓度较对照组急剧明显增 高；第二阶段，即静止期，癫痫组细胞内钙离子浓度较急性期先稍有 下降，然后呈逐渐升高趋势；第三阶段，即慢性期，癫痫组细胞内钙 离子浓度达到了一个新的高度，并维持在高水平。 4．实验组大鼠CA3区PV阳性中间神经元的数量和对照组比较 没有明显变化(P0．05)。而在CAl区，PV阳性中间神经元的数量 从6小时起呈进行性下降(Po。05)，到7天时达最低值(PO．01)， 60天时仍维持在低水平(Po．01)。在齿状回及门区，急性期和静止 期PV阳性中间神经元的数量较对照组均明显下降(P0．05)，15天 111 时达最低值(Po．01)，3