茄萼花色苷合成相关基因DFR和MYB克隆及表达分析.pdfVIP

中国农业科学 2017,50(14):2781-2792 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2017.14.014 茄萼花色苷合成相关基因 DFR 和 MYB 克隆及表达分析 1 2 1 1 王海竹 ，曲红云 ，周婷婷 ，徐启江 1 2 （东北林业大学生命科学学院/林木遗传育种国家重点实验室，哈尔滨 150040 ； 黑龙江省农业科学院园艺分院，哈尔滨 150040 ） 摘要：【目的】花色苷是一类通过类黄酮途径合成的水溶性次生代谢产物，既能使植物的不同器官呈现红、 紫、蓝等颜色，还有利于人体健康。紫茄富含花色苷，但是有关茄萼花色苷生物合成的分子机制还不是很清楚。 本研究旨在通过克隆茄萼花色苷合成相关基因 DFR 和 MYB，测定其在不同发育时期不同颜色茄萼中的表达量，探 究 DFR 和 MYB 在茄萼花色苷合成中的作用。【方法】选用绿萼和紫萼长茄（Solanum melongena L.）果萼为试材， 测定不同pH条件下茄萼花色苷含量；通过RACE方法分离克隆 DFR 和 MYB cDNA全长序列，分析 DFR 和 MYB 的保守 结构域及序列特征；分别对 DFR 和 MYB 及其同源蛋白序列进行系统进化分析，构建系统进化树来进一步分析鉴定 基因；使用ExPASy网站提供的在线分析软件SOPMA预测蛋白质二级结构；利用实时荧光定量PCR方法检测目的基 因在不同发育阶段果萼中的表达情况。【结果】从绿萼和紫萼长茄果萼中克隆了DFR 和 MYB 片段，分别命名为 ouSmDFR、dongSmDFR 和 ouSmMYB、dongSmMYB，GenBank登录号分别为：KX224250、KX224251 和KX224253、KX224254。 ouSmDFR 和 dongSmDFR 全长分别为1 285 bp 和1 249 bp，开放阅读框为858 bp和864 bp，分别编码285个和287 个氨基酸；ouSmMYB 和 dongSmMYB 全长分别为 969 bp 和 959 bp，开放阅读框均为 462 bp，编码 153 个氨基酸。 蛋白质二级结构分析表明α-螺旋和无规则卷曲均为两个DFR蛋白和两个 MYB蛋白的主要二级结构元件。序列比对 表明DFR蛋白具有NADPH结构域 （NADPH binding domain）和底物特异性结合结构域（Substrate specific binding domain），属于NADB-Rossmann超基因家族；MYB蛋白属于R2R3-MYB转录因子，具有R2、R3两个MYB结构域和bHLH 结合域。ouSmDFR 和 dongSmDFR 与 StDFR 和 SlDFR 具有相对较高的同源性；ouSmMYB 和 dongSmMYB 与 EsMYB 同源性 较高。花色苷含量测定显示，紫萼果茄萼花色苷含量较高且随着果实的发育成熟而逐渐增加；而绿萼茄萼几乎检 测不到花色苷。荧光实时定量 PCR 分析表明，DFR 和 MYB 在紫萼长茄果萼中表达量均远高于绿萼长茄；从初蕾期 到盛花期，紫萼长茄果萼中 DFR 和 MYB 表达量逐渐升高，而绿萼长茄则几乎没有变化，与两个品种茄萼颜色变化 相一致。【结论】 ouSmDFR 和 dongSmDFR 属于 NADB-Rossmann超基因家族，ouSmMYB 和 dongSmMYB 为典型R2R3-MYB 转录因子，DFR 和 MYB 在紫萼长茄果萼中表达明显高于绿萼长茄。推测 DFR 和 MYB 在茄萼呈色中发挥作用，并且 参与花色苷生物合成。 关键词：萼片；花色苷；DFR；MYB；基因表达；茄 Cloning and Expression Analysis of Anthocyanin Biosynthesis-Ass