用子房整体透明法和微分干涉差显微镜研究水稻的.pdf

遗传 HEREDITAS(Beijing)15(4):331993 用子房整体透明法和微分干涉差显微镜 研究水稻的胚胎发育 赵世绪 杜 中 凌祖铭 侧L京农业大学生物学院，北京 100094) TheUseofaWholeClearingTechniqueandDifferentialInterference ContrastMicroscopeforStudyonEmbryologyofRice ZhaoShixu Du Zhong LingZuming (BiologyCollegeofBeijinngAgriculturalUniversity,Beijing100094) 水稻的胚囊处于胚珠组织的包围之中，外面还有子房壁，以往观察子房都是用切片的方法．切片制作的过程相 当繁杂，并且需要掌握熟练的染色技术．根据连续切片来建立立体概念也需要经验．为了寻找观察胚囊结构的简 便方法，人们曾提出过胚珠水解压片法、整体解剖法、酶分离法等，但也需要精细的手工操作，并且不能保证每个 子房或胚珠都可获得其中的胚囊．整体透明是个比较好的方法，Herr(2〕采用胚珠整体透明法在相差和干涉显微 镜下观察一些植物的大袍子母细胞、大抱子和早期的胚囊；Young(4)用此法鉴定buffelgras，的无融合生殖过程 ；Stelly(3〕和杨弘远 （，‘用整体透明法结合用Mayershemalum或Ehrlichshematoxylin染色法在普通显微镜下 观察了烟草的胚珠和水稻子房中的胚囊结构．但是，他们所采用的染色方法中，染色时间因材料大小而异，比较难 掌握，并且因子房的其它部分也着色，因此，胚囊中结构图象不够清晰． 我们将水稻子房脱水后用水杨酸甲酷透明，直接在微分干涉差显微镜下观察水稻胚胎发育过程，从所得结果来 看，此方法比较简便，是可以推广应用的． 去雄授粉 10小时左右的子房，正开花和开花后 1-5天的梗稻461品系子房用95％乙醇和醋酸3（:1)固定24 小时后，换入70％乙醇保存．材料子（房）用95％乙醇脱水 10分钟，再用 100％乙醇脱水3次，每次 10分钟，最后一 次过夜．换水杨酸甲醋和100％乙醇混合液(1（:1）透明I小时以上，再用水杨酸甲醋透明3次，每次1小时以上，最后 一次放置24小时以上．将子房放在凹玻片上，浸泡在水杨酸甲酷中在Olympus微分干涉差显微镜下观察． 微分干涉差显微镜要求焦距很细微，因所观察的子房是整体的、立体的，卵细胞与助细胞、极核与反足细胞若 不在一个平面上，则一般较少看到，但调焦后可分别看到．虽然在此显微镜下看到的物体景象可能不如切片染色后 反差那样清晰，但是立体感和真实感强．图版I显示水稻胚囊结构及胚胎发育不同时期的景象． 我们体会到，此法在研究水稻胚胎发育及鉴定无融合生殖的发生过程方面甚为方便． 参 考 文 献 川 杨弘远：1986．植物学报，28(6):575-581. [2]Herr,J．M．etal.：1982.StainTechnol.，57：161一169. [3]Stelly,D.M.etal.:1984.StainTechnol.,59:155一161 [4]Young,B.A．：1970．Can.J.Bot..57：1668一1672． 本文于 1992年6月 12日收到 33 · 赵世绪等：用子房整体透明法和微分干涉差显微镜研究水稻的胚胎发育 图版 工 所有照片均为珠孔端朝下，合点端朝上排列．水稻子房整休透明 ！．正开花的子房，示卵细胞与助细胞．x50;2．示极核．x50;3．示反足细胞．x50;4.授粉后10小时子房，示合子及胚 乳游离核．x50;5．开花后一天的子房，示幼胚．x50;6，开花后2-3天的子房，示幼胚及其周围的胚乳细胞．x50;7，开花 后4天的子房．示幼胚．x50;8．开花后5天的子房，示开始分化的胚．x50