电容法在线测定发酵过程中毕赤酵母浓度的研究.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１４，３４（３）：９１９５ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 电容法在线测定发酵过程中毕赤酵母浓度的研究 １ １ ２ ２ １ １ 李　兰 　王泽建 　金　勇 　孙文华 　庄英萍 　张嗣良 （１华东理工大学　上海　２０１４２４　２浙江谱创仪器有限公司　） 摘要　活细胞量是与细胞生长、代谢、生产力相关的重要生理参数。在线活细胞测定仪能够利用 电容的原理检测发酵液中的活细胞量。本文详细介绍了国产在线活细胞测定仪的检测原理，并 说明了其在毕赤酵母发酵过程中的应用情况。结果表明，我们设计的在线活细胞测定仪能够直 接、实时、在线获得发酵过程中可靠的活细胞量，且有效避免采样操作的干扰。这一技术符合过 程分析技术（ＰＡＴ）的要求，并可以与其他参数相结合进行分析，作为发酵过程开发、控制和优化的 有利工具。 关键词　在线活细胞测定仪　活细胞量　在线电容测量　毕赤酵母　ＰＡＴ 中图分类号　Ｑ８１５ 　　可靠的活细胞量是每一个发酵过程中非常重要的 标准的严格建立，对生物过程进行细胞浓度的在线监 参数之一，活的、有代谢活力的细胞数量与生产率密切 测需求越来越广，在线活细胞测定仪的需求量越来越 相关。在许多发酵过程中都会采用动态补料策略来获 多，高额的仪器价格使得该仪器的应用受到了很大限 取较高的细胞密度和产物浓度，这些策略的实施都有 制。中科院写出报告指出，为了改变我国高端仪器大 赖于活细胞的数量，因此这一关键参数的实时测量非 部分靠进口的现状，努力振兴科学仪器事业，这将给我 ［１］ 国分析仪表制造技术和应用技术带来很大的发展空 常重要 。 ［４］ 　　传统的活细胞量测定方法如测定干重、吸光度和 间 。 离心体积等，具有操作复杂、滞后时间长、测定结果为 　　为此，我们自主研发了在线活细胞测定仪。四针 活细胞和死细胞总和的缺点。最直接的细胞量测量方 式电极位于传感器的顶部，一对用于在培养基中产生 法，如光学显微镜计数／染色分离，流式细胞术和电子 交变电场，由于在无线电频率范围内（１００ｋＨｚ～２０ 细胞计数器通常不适用于在线监测。而且，这些离线 ＭＨｚ），具有完整原生质膜的细胞发生极化现象，可以 方法都需要频繁采样，额外增加了发酵罐中培养基的 认为是极小的电容器［５］。另一对电极用于检测培养基 染菌风险。 中的电容信号，再经过前置放大器的信号处理、主机的 　　ＦＤＡ在２００４年９月公布了ＰＡＴ工业指南，将ＰＡＴ 软件分析计算，得到我们所需的电容值。如图１所示， 定义为一种可以通过测定关键性的过程参数和质量指 一种细胞形态为球状的生物样品，其电容信号随电场 ［２］ 频率的增加而降低，呈现出反Ｓ曲线，这种现象被称作 标来设计、分析、控制药品生产过程的机理和手段 。 ［６］ 在线活细胞传感仪在生物量监测方面的应用已经成为 β色散 。在较低频率范围内，细胞完全极化，电容值 ［３］ 很高；在较高频率范围内，只能检测到悬浮基质中由水 过程分析技术中很有发展前途的工具 。目前，国内 ［７］ 使用的在线活细胞传感仪只能从两个厂家