细菌细胞壁成分对牛乳腺上皮细胞株及嗜中性白血球趋化因子表现之.doc

PAGE 1 細菌細胞壁成分對牛乳腺上皮細胞株及嗜中性白血球趨化 因子表現之影響 The Effect of Bacterial Cell Wall Components on the Expression of Chmotactic Proteins in Bovine Mammary Epithelial Cells and Neutrophils 研究生：施昭如 Shi, Zhao-Ru 指導教授：余祺 Yu, Chi 李嘉偉 Lee, Jai-Wei 【摘要】 當乳腺組織受到病原菌感染時，乳房內的上皮細胞及免疫細胞會同時釋出趨化物質（chemoattractants），趨使嗜中性白血球往發炎部位移動。由目前之文獻結果顯示，IL-8（interleukin-8）在人類及牛隻皆具有趨化因子的特性，而GCP-2（granulocyte chemotactic protein-2）證實僅在人類之趨化功能，於牛隻所擔負的角色則有待證實。本試驗主要探討牛隻GCP-2於感染時期之表現，及其是否為誘導趨化反應之因子。試驗ㄧ、分別以細菌細胞壁成分之脂多醣體（lipopolysaccharide, LPS）、脂胞壁酸（lipoteichoic acid, LTA）及肽聚醣（peotidoglycan, PGN）感染體外培養之牛乳腺上皮細胞株，探討細菌細胞壁成分對GCP-2及IL-8表現量之影響。試驗二、以LPS、LTA及PGN刺激牛血液中分離之嗜中性白血球，測定GCP-2及IL-8 之表現，及GCP-2對嗜中性白血球之趨化特性。試驗一結果顯示，LPS 添加，可明顯誘發體外培養牛乳腺上皮細胞株GCP-2及IL-8 mRNA 之表現，以10 μg/mL LPS刺激24 h後，得最高之表現量。觀察LTA對乳腺上皮細胞株之刺激效應，顯示以 10 μg/mL LTA 刺激6 h後，可得較佳之IL-8 及GCP-2 mRNA表現。但高濃度PGN之添加，並無明顯誘發GCP-2及IL-8 mRNA表現之作用。比較LPS、LTA及PGN對乳腺上皮細胞株趨化激素基因之影響， LPS處理可迅速並大量誘發GCP-2及IL-8 之表現，其刺激效應顯著優於LTA及PGN處理組。試驗二之結果顯示，由血液分離之嗜中性白血球經6 h LPS刺激後，以1 μg/mL 添加組之IL-8及GCP-2 mRNA表現倍數最高，其表現量亦高於LTA及PGN處理組者。在GCP-2趨化嗜中性白血球之試驗結果顯示，以人類重組GCP-2 蛋白（recombinant human GCP-2, rHGCP-2）處理3 h後，其骨髓過氧化酶（myeloperoxidase, MPO）吸光值之表現，未隨添加rHGCP-2濃度的增加而上升，但若提高培養時間，牛隻嗜中性白血球MPO之吸光值則呈上升之趨勢，顯示rHGCP-2 亦具有趨化牛隻嗜中性白血球移動之效應。綜合上述，革蘭氏陰性及革蘭氏陽性菌之細胞壁成分，皆可誘發乳腺上皮細胞及嗜中性白血球GCP-2及IL-8 mRNA之表現，其中以LPS誘發之表現倍數最為明顯。由rHGCP-2處理趨使牛隻嗜中性白血球移動之試驗結果顯示，以不同濃度 rHGCP-2 處理3 h，仍不足於趨化牛隻嗜中性白血球之移動，然隨著處理時間增長，顯示rHGCP-2 關鍵字：乳房炎、乳腺上皮細胞、嗜中性白血球、IL-8、GCP-2 【Abstract】 Escherichia coli (Gram-negative) and Staphylococcus aureus (Gram-positive) are among the most frequently isolated species of pathogens that induce bovine mastitis. In response to the invading pathogens, residential immune cells and mammary epithelail cells release chemoattractants to recruite neutrophils, which migrate from the blood into the milk to perform their bactericidal functions. Interleukin (IL)-8 and a recently identified granulocyte chemotactic protein (GCP-2) are the members of chemokines and their chemotactic effects on neutrophils have