生物工艺与工程实验技术 贾士儒主编.pdfVIP

第 1 页 第 一 章　　生 物 工 艺 过 程 相 关 参 数 的检 测 第一节　　菌体量的测定 一、微生物菌体量的测定 对于微生物培养与管理 、动力学研 究及细胞成分分析 ，微生 物菌体量 的测定是不可缺少 的工作 ，其测定方法可分为基于细胞 物理性质变化 的直接法和基于细胞 内 （或外 ）成分变化换算而得 出的间接法 。这些方法有 的可迅速得 到结果 ，有 的虽精度很高但 非常 费时，因此在实 际使用 中应根据使用 目的与要求 ，选择适宜 的方法 。当微生物细胞 以单细胞 （无凝集性 ）形式生长时，培养 基 中悬浮粒子数 的增加可作为生长菌体量 ；对于霉菌 、放线菌等 以菌丝体形式生长 的，菌体量与悬浮粒子 间无对应关系 。另外 ， 液态培养基 中的不溶成分会影 响到菌体量 的测定 。固态培养 中由 于载体颗粒 的影 响 ，更多的是采用 间接法测定微生物菌体量 。 （一 ）质量 法 菌体量 的测定方法 中，质量法是最基本 的方法 ，其测定步骤 如 下 。 取样 （培养液量 ） 通常从 培养液 中可得到 的干菌体 ，基于此数据 可决定取样量并确定称量精度 。另外，可根据每一个大肠杆菌细胞 的干重为 这一数值，决定取样量 。三角瓶培养 中，最好取全 部培养液 。从大型发酵罐中取样时应注意菌体可能出现 的附壁生长 现象。另外，从取样管取样时应去除最初流出的培养液后再取样 。 对于霉菌培养中菌体量的测定，取样误差 占测定误差的主要部分。 第 2 页 菌体分离 过 滤 法 根 据 实验 的 目的 ，选择适 宜 的滤 纸 ，过 滤装置 也 极简单 这是过滤法 的优 点 。滤纸可分为深层过滤滤纸和表层 过 滤 滤 纸 两类 一般 定性 、定量 用纤维滤 纸 或 玻璃 纤维滤 纸 的纤 维 内部 能够保 留颗粒 ，因此为深层过滤用滤纸 。醋酸纤维或硝化 纤维制成 的隔膜滤纸 的表面上孔 隙度均一 ，能够截 留颗粒 ，因此 分类为表层过滤用滤纸。 由于隔膜滤纸 的微孔为过滤液 中颗粒覆盖 ，使液体过滤速度 急剧 下 降 ，因此 ，一般 隔膜 滤 纸主 要 用 于细 胞 数较少 时培 养 液 的浓缩和进行微生物分析等工作时的过滤除菌 。 通过过滤 收集菌体 时，滤纸截 留颗粒 的性能很重要 ，有必要 根据细胞 的大小 、形状选择适宜 的滤纸 。颗粒 的截 留量 以全部颗 粒 的 被 截 留作 为 选 择 依据 ，隔膜 滤 纸 的孔 径 范 围为 ，玻璃纤维滤纸为 ，定性 、定量 纤维滤纸 的 孔径范围为 一般细菌 、酵母 、霉菌等微生物细胞 的收集可采用玻璃纤维 滤 纸 。通 常将 滤 纸置 于布 氏漏 斗 （ ）中，进 行抽 滤 。玻璃纤维滤纸可耐 ℃高温 ，并且过滤速度快 。滤纸使用 前，应在室温条件下真空干燥 ，并称重 。 有 的样 品在 过 滤 前 需 要 进 行 处 理 。微 生 物 培 养 过 程 使 用 调节 时，应使用盐酸或 乙酸使残 留 溶 解 。培 养 基 中含有玉米浆 （ ）时 ，有 时会 出现蛋 白质沉淀 ， 加 大过 滤难度 另 外 ，培 养 液 的黏度 与 多糖 含 量 有 关 ，多糖 含 量 高时黏度会 明显增加 ，此时可通过加热 、添加凝 聚剂或水 的方法 进 行 处理 。作 为凝 聚剂 ，可 使 用 或 ，用 量 为 发酵液 ，必要时可加入定量好 的助滤剂 。