基于DNA与新型材料的荧光生物传感器的构建及应用研究-分析化学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 南开大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所 取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包 含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所 涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本 学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者签名： 宋婵 2015 年 5 月 27 日 非公开学位论文标注说明 (本页表中填写内容须打印) 根据南开大学有关规定，非公开学位论文须经指导教师同意、作者本人申 请和相关部门批准方能标注。未经批准的均为公开学位论文，公开学位论文本 说明为空白。 论文题目 申请密级 □限制(≤2 年) □秘密(≤10 年) □机密(≤20 年) 保密期限 20 年 月 日至 20 年 月 日 审批表编号 批准日期 20 年 月 日 南开大学学位评定委员会办公室盖章(有效) 注：限制★2 年(可少于 2 年);秘密★10 年(可少于 10 年);机密★20 年(可少于 20 年) 摘 摘 要 摘 要 近年来，荧光生物传感器的设计逐渐成为生命分析领域的研究热点。传感 器的灵敏度是衡量传感器性能的重要指标之一。目前，提升荧光传感器的灵敏 度主要有两种途径：一是利用酶切循环放大信号技术；二是引入强的荧光猝灭 剂。金纳米颗粒（Au NPs）、碳纳米管（CNTs）、氧化石墨烯（GO）等新型材 料被发现对染料标记的 DNA 探针具有强的荧光猝灭能力，因此被广泛地应用 于 DNA 荧光生物传感器的设计中。这些新型荧光猝灭剂的使用可大大降低背 景信号，有效地提高传感器的灵敏度。基于以上两种途径，本论文分别展开了 相应的研究。首先，利用核酸外切酶 III（Exo III）辅助信号放大的方法设计了 检测核酸内切酶活性的高灵敏度的荧光生物传感器。其次，本论文选择了特定 尺度的?-Fe2O3 NPs，基于四齿羧酸与金属钡元素构筑的金属有机骨架材料 （MOFs），三嗪与哌嗪构筑的多孔有机骨架材料（POFs）三种合成简单、性质 稳定、成本低廉的材料作为新型荧光猝灭剂。利用上述三种新型荧光猝灭剂， 本论文制备了具有高灵敏度的检测生物分子的新型荧光生物传感器。本论文具 体研究内容如下： 1、在第二章中，利用酶切循环放大技术构筑了分析限制性核酸内切酶活性 的 DNA 荧光生物传感器。Exo III 辅助信号扩增方法的引入有效地提高了该传 感体系的灵敏度，对核酸内切酶 EcoRI 的检出限可达 0.57 U mL-1。由于核酸内 切酶对底物链 DNA 具有特异性识别功能，因此本传感器具有良好的选择性。 此外，将底物链 DNA 的识别序列进行修改后，本方法还可用于其它核酸内切 酶活性的分析。 2、在第三章中，研究了不同尺寸的?-Fe2O3 材料与核酸之间的相互作用。 研究发现只有纳米尺寸的?-Fe2O3 粒子对不同结构的核酸具有不同的吸附能力。 此外，?-Fe2O3 NPs 还可作为单链 DNA 探针良好的荧光猝灭剂。上述特性使 ?-Fe2O3 NPs 能够被应用于生物传感器的设计中。本论文中利用操作简单的“混 合?检测”策略，以?-Fe2O3 NPs 为传感平台设计了检测核酸的 DNA 荧光生物 传感器。 3、在第四章中，利用钡元素作为节点，与含有酰胺键的四齿羧酸配体 H4L 构筑了金属有机骨架材料[Ba2(L)(H2O)]·(DMF)0.5(H2O)3（配合物 1）。配合物 1 I 对染料标记的不同长度的单链 DNA 探针具有不同的猝灭能力，利用该特性设 计了分析脱氧核糖核酸酶 I（DNase I）活性的荧光生物传感器。该传感器具有 不同于文献中所报道的基于金属有机骨架材料所构建的检测体系的传感机理。 4、在第五章中，考察了三嗪与哌嗪为构筑单元的多孔有机骨架材料 PAF-6 对染料标记的不同构型 DNA 探针的荧光猝灭能力。实验结果表明，PAF-6 对长 的单链 DNA 探针具有强的荧光猝灭能力，而对双链 DNA 探针及短的单链 DNA 探针猝灭能力较弱。基于上述特性，PAF-6 被成功地应用于检测单链 DNA 及分 析核酸外切酶 I（Exo I）活性的荧光生物传感器的构建中。 关键词：DNA，荧光，生物传感器，猝灭剂 II Abstract Abstract Abstract In recent years, the development of fluorescent biosensors has attracted considerable attention in the field of biomolecular analysis. And the sensitive is one