气相色谱在多糖结构测定中的应用.PDFVIP

文献综述 气相色谱在多糖结构测定中的应用 陶乐平 丁在富* 张部昌 安（徽大学生物系 合肥 230039） 提要 综述了适用气相色谱分析的多糖的降解方法、衍生物的制备、固定液的选择以及气相色谱在多糖结构测 定中的应用和最新进展。 关键词 气相色谱，多糖，结构测定 醇解结合三氟醋酸解可得到最佳的水解效果[4]。其 1 前言 次，醋酸、甲酸也常用于特定多糖的部分水解。如甲 气相色谱是多糖结构分析中最重要的手段之 基化多糖和多糖的高碘酸氧化产物的部分水解，所 一。它与质谱联用可以得出有关单糖残基类型、键的 得的短链寡糖经衍生化后可用气相色谱分离和鉴 连接方式、糖的序列和糖环形式、聚合度等多种结构 定。 信息。此外，由于大量的固定液和不同的检测器适用 2.2 甲醇解和醋酸解[5,6] 于糖的气相色谱分析，因而用气相色谱法测定糖类 这是多糖的水解与甲酰化或乙酰化同时进行的 具有选择性好、样品用量少、分辨率强、灵敏度高、分 一种水解方式。由于水解释放的还原末端迅即得到 析速度快以及可用于定性及定量分析等优点。 新形式的甲基或乙基糖苷的保护，从而使得中性单 气相色谱要求试样具有良好的挥发性和热稳定 糖的回收率大大提高[7]。同时，这些水解方式对脱氧 性。多糖本身为大分子物质，且由于含大量羟基不能 糖的破坏程度比硫酸小得多。甲醇解和醋酸解还可 在高温下直接挥发而不适用于气相色谱，因而将大 以使糖醛酸的羧基及神经氨酸 n（euraminicacid的 分子多糖降解为结构单糖或寡糖，并且将其衍生成 产物转变为相应的甲酯或醋酸酯，因而大大地提高 具有易挥发，对热稳定的衍生物的各种方法也应运 了它们的挥发性。这样，就使得利用气相色谱同时分 而生。通过对这些降解糖衍生物的定性和定量测定， 离鉴定含中性、酸性和碱性糖的多糖和糖蛋白成为 即可得出多糖的基本结构。本文将从多糖在气相色 可能。常用的甲醇解试剂为无水盐酸-甲醇，而醋酸 谱分析前的预处理出发，介绍适用于气相色谱分析 解试剂则为冰醋酸-醋酸酐 1：1,V/V）及硫酸的混 的各种多糖的降解方法、衍生物的制备、固定液的选 合物。Roberts等[8]还将甲醇解方法进一步简化，并 择以及气相色谱在多糖结构分析中的应用和最新进 用硫酸代替氯化氢，甲醇解产物的产率也大为提高。 展。 2.3 碱降解 它是断裂N-糖苷键的有效方法。此法可以提供 2 多糖的降解 一些酸水解不能获得的结构信息。为了防止所得的 2.1酸水解 寡糖被进一步水解，碱降解需要在还原剂如硼氢化 酸水解是气相色谱技术用来确定多糖中各种单 钠的存在下进行[9。 糖组分的前提。应根据不同键的水解难易和不同单 2.4 甲基化分析 精的稳定性确定糖的最佳水解条件[1,2]。常用于水解 甲基化是多糖结构测定中最重要的手段。气相 多糖的酸类有：盐酸、硫酸和三氟醋酸。硫酸主要用 色谱所能提供的多糖的大部分结构信息都是从对多 于水解中性糖；三氟醋酸可用于植物细胞壁多糖、糖 糖的甲基化水解产物的分离、鉴定来完成的。常用的 蛋白及糖胺聚糖的水解；而盐酸则用于糖蛋白和含 甲基化试剂有：硫酸二甲酯与氢氧化钠 Haworth 氨基脱氧糖的多糖水解[3]。Ruiter等[4]比较了这些