小鼠血管平滑肌细胞原代培养及体外钙化模型的制备-江苏大学.PDFVIP

第２４卷第２期 江 苏 大 学 学 报（医学 版） Ｖｏｌ．２４ Ｎｏ．２ 　 ２０１４年３月 　 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＭｅｄｉｃｉｎｅＥｄｉｔｉｏｎ） Ｍａｒ．２０１４ 　 　 　 　 　 　 小鼠血管平滑肌细胞原代培养及体外钙化模型的制备 徐丽华，严金川，伍超，逯朝阳，王中群，袁伟 （江苏大学附属医院心内科，江苏 镇江２１２００１） ［摘要］　目的：建立一种简单、高效的小鼠主动脉血管平滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓ，ＶＳＭＣｓ）原代培养方 法及体外钙化模型。方法：采用改良的组织贴块法培养小鼠ＶＳＭＣｓ，经免疫荧光染色法鉴定后，将细胞随机分为对照 组和钙化组。采用ｖｏｎｋｏｓｓａ染色及比色法检测两组细胞内钙含量。结果：培养３～５ｄ时，可见细胞从组织块边缘爬 出，７～１０ｄ后细胞融合成片；免疫荧光染色显示胞质表达特异性 肌动蛋白；ＶＳＭＣｓ培养至第２代细胞纯度达９５％； α 与对照组相比，钙化组细胞的钙含量、碱性磷酸酶（ＡＬＰ）活性明显增加（Ｐ均＜０．０５）。结论：改良的组织贴块法可获 得高纯度的小鼠ＶＳＭＣｓ；甘油磷酸钠在体外可有效诱导其钙化。 β ［关键词］　血管平滑肌细胞；原代培养；钙化 ［中图分类号］　Ｒ５４３　　　［文献标志码］　Ａ　　［文章编号］　１６７１－７７８３（２０１４）０２－０１１０－０４ ＤＯＩ：１０．１３３１２／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１７７８３．ｙ１３０２６２ Ａｍｏｄｉｆｉｅｄｍｅｔｈｏｄｆｏｒｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ ａｏｒｔｉｃｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｏｆｍｏｕｓｅ ＸＵＬｉｈｕａ，ＹＡＮＪｉｎｃｈｕａｎ，ＷＵＣｈａｏ，ＬＵＺｈａｏｙａｎｇ，ＷＡＮＧＺｈｏｎｇｑｕｎ，ＹＵＡＮＷｅｉ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣａｒｄｉｏｌｏｇｙ，ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＺｈｅｎｊｉａｎｇＪｉａｎｇｓｕ２１２００１，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｓｉｍｐｌｅａｎｄｅｆｆｉｃｉｅｎｔｍｅｔｈｏｄｆｏｒｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅｏｆｍｏｕｓｅａｏｒｔｉｃ ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓ（ＶＳＭＣｓ）ａｎｄｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｍｏｄｅｌｉｎｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅｐｒｉｍａｒｙＶＳＭＣｓ ｗｅｒｅｈａｒｖｅｓｔｅｄｂｙｍｏｄｉｆｉｅｄｔｉｓｓｕｅｐｉｅｃｅｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｔｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ＶＳＭＣｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ．Ｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｓｗａｓａｓｓａｙｅｄ ｂｙｖｏｎｋｏｓｓａｓｔａｉｎｉｎｇａｎｄｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＶＳＭＣｓｍｉｇｒａｔｅｄｆｒｏｍｅｘｐｌａｎｔｓｏｆｍｏｕｓｅａｏｒｔａｔｉｓ ｓｕｅａｆｔｅｒ３５ｄａｙｓｏｆｃｕｌｔｕｒｅ．Ａｆｔｅｒ７１０ｄａｙｓ，ＶＳＭＣｓｇｒｅｗｔｏｆｏｒｍａｆｕｓｉｎｇｍｏｎｏｌａｙｅｒ．Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓ ｃｅｎｃｅｓｔａｉｎｉｎｇｗｉｔｈｓｐｅｃｉｆｉｃｍＡｂａｇａｉｎｓｔｍｏｕｓｅ ａｃｔｉｎｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄＶＳＭＣｓｗｅｒｅｐｏｓｉｔｉｖｅ．Ｔｈｅｃｅｌｌｐｕｒｉｔｙ α ｎｄ