假丝酵母中金属硫蛋白的分离、纯化及功能研究-微生物学专业论文.docxVIP

摘要I 摘要 I 【金属硫蛋白(Metallothionein，MT)是一类低分子量、高金属含量、高半胱氨酸含量的 小分子命属结合蛋白。它广泛存在于脊椎动物、无脊椎动物、植物、真菌、细菌等的组织器 。l”hⅢ能被多种幽索绣甘产生，御152|j付巫仓槭高一f-、消除自由基、拮抗电离辐射等方面发 挥省卜分重要的作刚。同u寸，州的产生还与老驴陛痴呆症(Alzheimer’s disease，AD)、V／ilSOn 瘸等多种簇病密切干u关。MT在医药、环保等力m的重要作用，使之成为近年来的研究热点之 。r 本课题采用本实验室保存的一株哩丝醛堡堂丛(Candida印．Cu一12)，对其由Cu“诱导产 ￡j：的蛋白进行分离、纯化和鉴定。经葡聚糖凝胶(Sephadex 6-100)层析和离子交换(纤维 索DE一52)层析，分离纯化出cu“诱导的假丝酵母蛋白纯品及其4个亚型。 理化性质及氨基酸组成测定结果显示，分离得到的垫垡里鱼盈其亚型的平均分子量约为 67001)a：蛋白分子由约67个氨基酸组成，其中半胱氨酸数约为14个，占氨基酸总数的20．9％； 每摩尔蛋白含有约6个cu原子：等电点为5．44：纯化的蛋白及其亚型均在260HM有紫外特征 吸峻!。 分离纯化得到的蛋白及其亚型的理化性质参数符合MT的基本性质，确定是假丝酵母中经 cu2+诱导产生的Cu—MT及其4个亚型MT一1，MT～2，MT～3和MT一4。此前未见关于假丝酵母中cu—MT 的相关报道。 在清除自由基的功能实验中，纯化出的假丝酵母Cu—MT表现出极强的趁鱼由茎(oH)清 除能力和较好的氧自由基(0：一)清除能力。其对自由基的清除能力好于酿酒酵母MT和对照 药剂抗坏』缸酸。 关键词：金属硫畲否／名丝诼每7。u2．自苫≤ ．4沁； AbstractMetallothioneins(MTs)， Abstract Metallothioneins(MTs)， a class of inducible metal—binding proteins， characterized by low m01ecular wei ght，a hlgh coetent of cysteiRe，a lack of aromatic amino acid residues and heat stability．MTs wildly exist in ti ssues and organs of vertebrates，i nvertehrates，plants，fungi and bacteria．They play very important teles in absorbing heavy metal ions，scavengj ng free radicals，resi sting radiation，etc． and relati ve with the occuFrence of Alzheimer 7 S disease(AD)、WiIson’s disease and so on．Because of its broadlY appl ications in the fields of medicine．environment protection，etc．，MT became one of hot spots in recent researches． rhi s subject is beginning with a Cand／da strain(Candida sp，Cu—12)，which was conserved in OUF lab．We first i nduced the strain producing a new type of protein by copper ions，and then separation and purlfication this new protein with Sephadex G—100 and Ce]1ulose DE一52．We got purlfied Cu—protein and its 4 isoforms． Physical and chemical characters determination and amino acid temposition anal ysis data show that，this protein’s toolecular weight is about 6700Da．It consists of about 67 ami no acid residues，including 14 cysteine residues which are 20．9％among the