健康及化疗儿童HPRT基因突变频率和表鬼臼毒素对其影响-儿科学(血液肿瘤)专业论文.docxVIP

健康儿童及化疗后患儿HPRT基因突变频率及表鬼臼毒素累计对其动态影响 健康儿童及化疗后患儿HPRT基因突变频率 及表鬼臼毒素累计对其动态影响 室之磅两铆{’， 中文详细摘要 f第一部分 表鬼臼毒素对HPRT基因位点的影响． ， ／ (表鬼臼毒素VPl6和VM26是拓扑异构酶II的抑制剂，广泛地 应用于抗肿瘤治疗中。然而与其治疗相关的急性髓细胞白血病 (AML)的发生限制了他们在一些化疗方案中的应用。实验中，我 们动态观察了Jurket白血病细胞在不同浓度不同作用时间的VPl6 和VM26处理下，发生AML的危险因素。我们已知，V(D)J(variable— diversity-joining)重组酶可以引起次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (hypoxanthine phosphoribosyltransferase HPRT)基因2、3外显子 的缺失，因此，1利用V(D)J重组酶介导的HPRT基因2、3外显 ／ 子的缺失频率作为生物剂量计，监测表鬼臼毒素引发的AML发生 的危险度。 利用处理组与对照组细胞活力相比较，检测VPl6处理后6天 的细胞毒性作用。巢式PCR方法检测HPRT基因2、3外显子缺失 频率。 f在HPRT基因2、3外显子缺失的情况下，Jurket细胞仍能够存 ～ 活并生长。细胞毒性和HPRT基因2、3外显子的缺失频率均随着VPl6 的处理浓度和接触时间的增加而升高。两者的细胞毒性作用在VPl6 和，或VM26处理24小时组显著高于4小时处理组(P0．01)。给药 后继续培养6天，VPl6处理组4小时细胞的HPRT基因2、3外显 子缺失频率升高趋势显著高于24小时处理组(PO．01)。在相同的 细胞毒性下，缺失频率分别是107．7×10‘8(VPl6作用浓度为1 u M) 和55．79×104(VPl6作用浓度为0．25 uM)；相同的VPl6处理浓度 下，4h缺失频率89．17×10’8高于24h外显予2、3的突变频率55．79 ×10‘8(P0．01)。但是VM26处理组细胞4小时和24小时之间HPRT 基因2、3外显子的缺失频率没有显著差异(P0．05)。尽管基因的 缺失频率与细胞毒性作用相关，但VPl6和VM26 缺失频率与细胞毒性作用相关，但VPl6和VM26 4小时处理组的基 因突变频率显著高于或至少不低于24小时的突变频率。厂]一一～。 另外我们还通过PCR方法检测了HPRT基因其他几个外显子的 缺失情况。f结果显示，VPl6和VM26可以引起除2、3外显子以外 其他外显子的缺失，但缺失是随机的。尸 我们认为，VPl6和VM26能引起HPRT基因2、3外显子V(D) J重组酶介导的缺失。小剂量延长VPl6和VM26的处理时间比短期 大剂量处理组能达到更好的治疗效果((即发挥较强的细胞毒性作 用)。大剂量VPl6或VM26可产生强的细胞毒性但HPRT基因缺失 频率却较低，提示得到治疗期望的细胞毒性作用同引起HPRT基因 突变频率之间不是不可分的。并且HPRT基因2、3外显子突变频率 是一个可靠的生物剂量计。我们期望进一步的临床研究中能通过延 P—-_一 1～n 长给药时间达到降低VPl6和VM26相关AML危险性√7 ，缎弘 关键词： 表鬼臼毒素 继发肿瘤 HPRT 生物剂量计y捏再i习 第二部分、健康儿童I-IPRT基因突变频率及化疗对ItPRT基因突变频率的影响， 第二部分、健康儿童I-IPRT基因突变频率 及化疗对ItPRT基因突变频率的影响， HPRT基因突变频率通常被用于监测环境、治疗、职业等的接 触可能引起人类基因突变的有效方法。为了得到中国儿童HPRT基 因突变频率的基值，使用T一细胞克隆的方法选择外周血淋巴细胞 抗6．硫鸟嘌呤细胞，来决定健康儿童HPRT基因突变频率。f实验中 检测97例上海健康儿童志愿者，其中男52例，女45例，年龄从 0岁到l 5岁。 我们检测了97名健康儿童志愿者外周血，HPRT基因突变频 率从O．098×10。到7．30×10一。志愿者的年龄对HPRT基因位点的 突变频率有显著影响，结果表明每一年龄段(5年)分别升高1．76／106 个细胞和0．85／106个细胞。不同性别之间基因的突变频率没有显著 差异。从0月(脐血)到15岁，T．淋巴细胞的HPRT基因位点的 突变频率有线性关系。 同时我们通过分离外周血淋巴细胞抗6一硫鸟嘌呤体细胞突变的 方法，估计了抗癌药物的基因毒效应。研究人群包括有26例急性 淋巴细胞白血病患儿和4例急性粒细胞白血病患儿，其中ALL患 儿中高危6例，中危10例，低危8例。30例白血病患儿HPRT基 因突变频率的均值是6．61 3±3．3019×10～，显著高于同龄正常儿童 的基因突变频率。ALL高危患儿的基因