兼香型白酒高温大曲微生物群落演替规律的研究-微生物学专业论文.docxVIP

华中农业大学2016届硕士研究生学位(毕业)论文2．2理化指标测定方法 华中农业大学2016届硕士研究生学位(毕业)论文 2．2理化指标测定方法 ．．14 2．2．1温度的测定 14 2．2．2酸度的测定 14 2．2．3还原糖的测定 15 2．2．4糖化力的测定 17 2．2．5液化力的测定 19 2．3可培养微生物的计数及鉴定方法 一21 2．3．1实验所用培养基及配制 21 2．3．2稀释平板法测定大曲微生物数量 21 2．3．3可培养微生物的鉴定 22 2．4大曲基因组总DNA提取及质量检测 27 2．5 16S rDNMTS扩增子测序 ．28 2．5．1测序与拼接 28 2．5．2信息分析流程 29 2．5．3 OTU分析 30 2．5．4物种分类和丰度分析 ．30 2．5．5样品复杂度分析 3 1 3结果与分析 32 3．1理化指标的测定 ．．32 3．1．1温度 32 3．1．2酸度 33 3．1．3还原糖 34 3．1．4糖化力 35 3．1．5液化力 36 3．2可培养微生物的计数及鉴定 ．．37 3．2．1微生物计数 37 3．2．2细菌菌落形态及种类鉴定 38 3．2．3真菌菌落形态及种类鉴定 40 3．3微生物群落结构变化规律的解析 ．．42 3．3．1基因组总DNA提取结果 ．．42 TT 万方数据 兼香型白酒高温大曲微生物群落演替规律的研究3．3．2 兼香型白酒高温大曲微生物群落演替规律的研究 3．3．2 OTU数量变化趋势 42 3．3．3细菌物种分类和丰度分析结果 44 3．3．4细菌样品复杂度分析结果 46 3．3．5真菌物种分类和丰度分析结果 50 3．3．6真菌样品复杂度分析结果 52 4讨{仑 ．．55 4．1小结 ．55 4．2高温制曲过程中理化指标与微生物群落的关系 ．．56 4．3高温制曲过程中细菌群落结构解析 ．．58 4．4高温制曲过程中真菌群落结构解析 ．．59 4．5展望 ．60 参考文献 61 已发表的学术论文 70 致谢 ．71 III 万方数据 兼香型白酒高温大曲微生物群落演替规律的研究摘要 兼香型白酒高温大曲微生物群落演替规律的研究 摘要 兼香型白酒作为我国传统白酒的创新酒种，以独特的酱、浓融合的生产工艺特 点和优雅的兼香而闻名。大曲在中国兼香型白酒生产过程中起着独一无二的作用， 由于受到传统发酵特点及其研究方法的限制，使得对高温制曲过程中微生物的群落 结构研究和认识还很有限。本试验以兼香型白云边酒高温大曲不同发酵阶段9个样 品为研究对象，利用理化分析技术和高通量测序技术对发酵过程中大曲的理化指标 变化规律和微生物群落进行分析，得到以下主要研究结论： 理化指标结果表明，温度在进入培菌期后迅速上升，最高可达62．3℃，之后持 续下降至接近室温；酸度和还原糖含量在进入培菌期后迅速上升后持续下降，之后 有所回升；糖化力和液化力在进入培菌期后迅速下降，一直维持在较低水平，进入 储藏期后开始回升，成熟大曲中分别为158 u／g和1．2 u／g。 稀释平板计数结果表明，细菌总数在培菌期间首先快速下降，之后持续回升， 第50 d达到最高值2．73×106 CFU／g，进入储藏期后开始下降；芽孢杆菌数量在培菌 期开始上升，第14 d后的变化趋势与细菌保持一致；芽孢杆菌百分比在进入培菌期 后先上升后下降，最后持续上升，在第140 d达到69．1％；霉菌数量在培菌期都较少， 进入储藏期后迅速持续上升，成熟大曲中达到2．83×105 CFU／g：酵母菌仅在个别样 品检出。 从成熟大曲中分离筛选出11株不同的微生物，其中3株细菌：Bacillus amyloliquefaciens,Bacillus methylotrophicus,Bacillus licheniformis．均为芽孢杆菌属； 1株酵母菌：Saccharomycopsisfibuligera；7株霉菌：Beauveria bassiana,Eurotium athecium，Eurotium amstelodami,Aspergillus versicolor,Thermoascus crustaceu Mycocladus corymbiferus,Paecilomyces variotii。 细菌群落1 6S rDNA扩增子测序分析结果表明：样品OTUs数量在进入培菌期 后首先剧烈下降，然后快速上升，后又有一次下降与回升，进入储藏期后持续下降； 所有样品中共获得11 7个OTUs分类，优势菌门是Firmicutes和Actinobacteria，优 势菌科是Bacillaceae，Thermoactinomycetaceae，Pseudonocardiaceae和Lactobacillaceae， 优势菌