剑麻皂苷元生物转化生产方法的研究-生物学;植物学专业论文.docxVIP

Classified Classified Index：Q94 Code： 10224 Confidential(yes／no)：no NO．： 100104 Dissertation for the Doctoral Degree Research on Production Methods of Sisal Sapogenin by Biotransformation Candidate：Wang Yanchao Sut Dr：Prof．Hrot． H ao Zaibin Degree C ategory：Doctor of Science College：School of Life Science First level discipline：Biology Second level discipline：Botany Harbin China December 2014 万方数据 目 目 录 目录 ㈣Y27㈣7 1㈣825眦 中文摘要 I 英文摘要 ．III 1前言 1 1．1研究背景 l l，2本研究的目的与意义 ．2 1．3剑麻成分及其用途 2 1．3．1硬质纤维 2 1．3．2甾体皂苷 。2 1．3．3果J技 ．．6 1-3．4其它 ．6 1．4皂苷类物质的分类及甾体皂苷的理化性质 ：．． 7 1．4．1皂苷类物质的分类 7 1．4．2甾体皂苷的理化性质 7 1．5剑麻皂苷元的提取 8 1．5．1酸水解法 ．．8 1．5．2微生物转化法 10 1．6甾体皂苷类物质的检测 一12 1．6．1紫外．可见分光光度法(UV-vIs法) 12 1．6．2流动注射化学发光法(FI．CL法) 12 1．6．3高效液相色谱法(HPLC法) 14 1．6,4目前使用的国家检测标准 15 2材料与方法 16 2．1实验材料 ．．1 6 2．2主要仪器与试剂 一16 2．2．1仪器 一 ．16 2．2．2试剂 l 7 2．3剑麻皂苷的生产 ．．17 2．3．1剑麻皂苷的分离提取 ．17 2．3．2紫外．可见分光光度法检测剑麻皂苷 ．19 2．3．3流动注射化学发光法检测剑麻皂苷及其检测条件的优化 19 2．3．4大孔树脂法分离纯化剑麻皂苷 ．20 2．4剑麻皂苷元的生产 一21 2．4-．1剑麻皂苷元的分离提取 ．21 2．4．2反向高效液相／蒸发光散射检测器色谱法检测剑麻皂苷元 ．．22 2．4．3流动注射化学发光法检测剑麻皂苷元及其检测条件的优化 22 l 万方数据 东北农业大学理学博士学位论文2．4．4硅胶柱层析法分离纯化剑麻皂苷元 东北农业大学理学博士学位论文 2．4．4硅胶柱层析法分离纯化剑麻皂苷元 一23 2．4．5产剑麻皂苷元菌株的筛选及鉴定 23 2．4．6菌株ZG．21发酵产剑麻皂苷元条件的优化 ．．28 2．4．7菌株ZG．21产皂苷元降解酶的提取及酶促反应条件的优化 29 3结果与分析 ．．33 3．1剑麻皂苷的生产 33 3．1．1比色法检测剑麻皂苷 ．33 3．1．2流动注射化学发光法检测剑麻皂苷及其检测条件的优化 33 3．1．3大孔树脂法提取剑麻皂昔的优化 ．．37 3．2剑麻皂苷元的生产 40 3．2．1剑麻皂苷元的溶解度 ．40 3．2．2比色法检测剑麻皂苷元 ．41 3．2．3反向高效液相／蒸发光散射检测器色谱法检测剑麻皂苷元 ．．41 3．2．4流动注射化学发光检测剑麻皂苷元及其检测条件的优化 42 3．2．5硅胶柱层析分离纯化剑麻皂苷元 ．．45 3．2，6产剑麻皂苷元菌株的筛选及鉴定 ．．48 3．2．7菌株ZG．2l的分子生物学鉴定 ．53 3．2．8菌株ZG．21的生理生化特性鉴定 ．55 3．2．9菌株ZG．21产剑麻皂苷元发酵条件的优化 一56 3．2．10菌株ZG．21产皂苷元降解酶的提取及酶促反应条件的优化 ．63 3．2．11菌株ZG．21皂苷降解酶的纯化 69 4讨论 ．70 4．1在线检测技术与末端检测技术的比较 70 4．2皂苷及皂苷元的清洁生产 70 4．3降解剑麻皂苷糖基菌株生物转化机理的探究 71 4．4生物转化产剑麻皂苷元的影响因素 71 4．5下一步工作展望 一72 5结论 ．73 致谢 74 参考文献 ．75 附录 ．84 攻读博士学位期间发表的学术论文 ．．85 II 万方数据 CONTENTSC CONTENTS C oNTENTS Abstraet in Chinese ． l Abstract in English．．．．．．．．．．。．．．．． ．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．． ． ．．．．．．． ．．．．．． ．． ．．．．．．．．．．．．．III 1．In