基于Notch通路探讨片仔癀对大肠癌干细胞增殖、凋亡、分化的影响及作用机制-中西医结合基础专业论文.docxVIP

致谢 致谢 24 文献综述 25 作者简历 30 Ill 万方数据 中文摘要目的：通过细胞实验研究片仔癀(PZH)对大肠癌干细胞生长的影响，并探讨PZH作用 中文摘要 目的：通过细胞实验研究片仔癀(PZH)对大肠癌干细胞生长的影响，并探讨PZH作用 于大肠癌干细胞的分子机制，为其临床治疗大肠癌提供更丰富的理论基础。 方法： 1．片仔癀对大肠癌干细胞生物学影响：选择大肠癌细胞SW480和HT-29两株细胞， 分别用不同浓度(0，0．25 mg／mL，0．5 mg／mL，0．75 mg／mL)PZH干预24 h后，采用侧群细 胞(SP)分析法检测PZH对两株大肠癌细胞中干细胞比例的影响。然后采用SP法分别 从两株大肠癌细胞中分选出大肠癌干细胞，并用不同浓度PZH进行干预。采用MTS检 测大肠癌干细胞增殖情况；通过Hoechst 33324染色观察大肠癌干细胞凋亡情况；通过 Q．PCR检测CK20的表达评估PZH对大肠癌干细胞分化的影响。 2．片仔癀抑制大肠癌干细胞生长的分子机制：选择大肠癌细胞SW480，通过SP法 分选出大肠癌干细胞，并用不同浓度PZH干预，采用Q．PCR和Western Blot分别检测 片仔癀对大肠癌干细胞Notch信号转导通路中关键基因Notchl、Hesl在基因和蛋白水 平表达的影响。 结果： 1．片仔癀对大肠癌干细胞生物学影响：(1)PZH干预显著降低大肠癌干细胞比例： SP分析法检测显示PZH干预能够显著降低两株大肠癌细胞中干细胞的比例，并呈现一 定的剂量依赖性(尸0．05)；(2)PZH干预抑制大肠癌干细胞增殖：MTS检测显示PZH 干预能够显著降低两株大肠癌细胞中干细胞的活力，并呈现一定的剂量依赖性 (P0．05)；(3)PZH干预诱导大肠癌干细胞凋亡：Hoechst 33342染色结果显示随PZH 浓度增加，SW480和HT-29干细胞中均有细胞核出现高染或核固缩变亮的细胞数增加 的现象；(3)PZH干预能够显著增加分化指标CK20的表达：Q．PCR和Western．blot 检测提示PZH在大肠癌干细胞中均能够显著上调CK20的表达(尸O．05)。 2．片仔癀作用大肠癌干细胞的分子机制：PZH干预能够调节大肠癌干细胞中Notch 信号通路：Q．PCR和Western Blot检测提示PZH能够显著下调SW480干细胞Notch信 号转导通路中关键基因Notchl，Hesl在基因和蛋白水平的表达。 结论： 细胞实验证实片仔癀具有显著抑制大肠癌干细胞增殖、促进细胞凋亡和分化的作 TV 万方数据 用，且通过调控Notch信号转导通路中关键基因Notchl、Hesl的表达可能是其重要机制。 用，且通过调控Notch信号转导通路中关键基因Notchl、Hesl的表达可能是其重要机 制。 关键词：片仔癀，肿瘤干细胞，侧群细胞，Notch信号通路 V 万方数据 万方数据 万方数据 AbstractObjective：To Abstract Objective：To evaluate the effect of Pien Tze Huang(PZH)on colorectal cancer stem cells in vitro，and investigate the underlying mechanisms． Methods： 1．In vitro study：In this study we isolated the stem-like side population(SP)from the human colorectal cancer(CRC)SW480 and HT-29 cell lines to investigate its effect on cancer stem cells(CSCs)as well aS the possible molecular mechanism．To evaluate the effect of PZH on cancer stem cells，we determined the percentage of SP cells．Cell viability by MTS assay WaS examined to determine the effect of PZH on cell proliferation．Hoechst staining was used to aSsess cell apoptosis．Q-PCR and Westem—Blot were used to determine the mRNA and protein expression of CK20 to evaluate the differentiation of CSCs．Q