第三章-细胞生物学研究方法.pptVIP

优点：实现直接观测单个分子的反应动力学的途径 测量单一分子间相互作用力 捕捉单一分子随机过程和分子构想变化的中间态 测量稀发但重要的信号和分布 测量非平衡态和不同步的体系 三、酵母双杂交技术 转录激活因子往往由两个或两个以上相互独立的结构域构成, 其中有DNA结合结构域（BD）和转录激活结构域（AD），单独的BD能与特定基因的启动区结合，但不能激活基因的转录，而由不同转录调控因子的BD和AD所形成的杂合蛋白却能行使激活转录的功能。 四、荧光共振能量转移技术 原理：在一定波长的激发光照下，只有携带发光基团A的供体分子可以被激发出波长是A的荧光，而同一激发光不能激发携带发光基团B的受体分子发出波长是B的荧光，当吸收光谱A和吸收光谱B重叠，并且两个发光基团距离小到一定程度时会发生不同程度的能量转移，受体分子发出了波长是B的荧光 五、放射自显影技术 原理：利用放射性同位素的电离射线对乳胶的感光作用，对细胞内生物大分子进行定性、定位与半定量研究 步骤：选合适的放射性前体分子做标记——按标记时间做标记——制片——曝光——再显影——定影——观察 特点：可以对细胞内生物大分子进行动态研究和追踪 第五节 模式生物与功能基因组的研究 一、细胞生物学研究常用的模式生物 理想的研究材料是研究成功的关键 在生物研究中通常采用：噬菌体、大肠杆菌、酵母、线虫、果蝇、四膜虫、黏菌海胆、拟南芥、斑马鱼和小鼠等 特征：个体较小、容易培养、操作简单 大肠杆菌 原核生物的代表，一条环状DNA，大约编码4288个基因 特点：培养方便，生长快，基因结构简单，突变株的诱导、分离和鉴定容易 酵母 单细胞真核细胞的代表，有芽殖酵母，裂殖酵母 线虫 成体长约1mm，由959个细胞组成 线虫繁殖快，生长周期为3天，在显微镜下通体透明。胚胎发育过程中细胞分裂、分化及死亡具有高度的程序性 果蝇 黑腹果蝇大约编码13600个基因作为遗传学的模式生物有100多年，与人类基因有很高的同源性 二、突变体制备技术 RNA干扰法包括瞬时干扰和永久干扰 RNAi是利用一段特意的双链RNA或单链反义RNA通过注射、转染或转基因的方法导入到细胞或模式生物中，这样的RNA可以启动一套信号通路来最终降解与这段RNA对应的，通常是包含这段序列的mRNA，使该mRNA无法翻译成相关蛋白质。 DNA敲除 1.化学有变法：喂食有化学诱变剂的食物造成配子染色体突变 特点：突变率高，但基因难定位 2.P因子介导的突变：利用转座子带走部分DNA序列改变基因 特点：突变率低，但针对性强 3.基于同源重组的定点突变：基于同源重组技术 特点：特异性高、受基因位置限制少、可在任意位点突变，但是相对耗时耗力 三 蛋白质组学技术 蛋白质组学：全面研究细胞、组织乃至整个生命体内蛋白质组成及其活动规律的科学。 双向凝胶电泳 色谱技术 质谱 蛋白质芯片 生物信息学 A comparison of yeast cells that were growing on the vaginal epithelium seen with different types of LM. a)under bright-field; b)phase-contrast; c)DIC Examples of negtively stained and metal-shadowed specimens. Electron micrographs of a tobacco rattle virus after negtive staining with potassium phosphotungstate(a) or shadow casting with chromium(b). 第三章 细胞生物学研究方法 ?细胞形态结构的观察方法 ?细胞组分的分析方法 ?细胞培养、细胞工程与显微操作技术 第一节 细胞形态结构的 观察方法 ?光学显微镜技术（light microscopy） ?电子显微镜技术 (Electro microscopy) ?扫描探针显微镜（Scanning Probe Microscope） 扫描遂道显微镜 (scanning tunneling microscope ) 第二节 细胞组分的分析方法 ?离心分离技术 ?细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的 显示方法 ?特异蛋白抗原的定位与定性 ?细胞内特异核酸的定位与定性 ?放射自显影技术 ?定量细胞化学分析技术 第三节 细胞