基于愈创木酚荧光减量准确测定过氧化物酶活性的新方法-分析化学.PDF

第43卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 研究报告 第7期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2015年7月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 1040~1046 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.150115 基于愈创木酚荧光减量准确测定过氧化物酶活性的新方法 1 *1 2 赵 炀摇 李永生 摇 高秀峰 1 2 (四川大学化学工程学院,成都610065)摇 摇 (四川大学基础医学与法医学院,成都610041) 摘摇 要摇 利用H O/ 过氧化物酶(POD)/ 愈创木酚(GA)反应体系的产物(470 nm)吸光度去定量POD活性是 2 2 目前常用方法之一,但产物不稳定且对比色皿有吸附现象是该反应的主要缺点之一。 为了解决此问题,本研 究利用GA 的荧光特性建立了一种能准确测定POD活性的方法。 用辣根过氧化物酶(HRP)作为测试样品得 到了以下优化条件:0.5 mmol/ L GA,0.5 mmol/ L H O ,0.05 mol/ L PBS缓冲液(pH6.0),反应温度20益,样 2 2 品耗量20 滋L;本方法的线性范围为500~60000 U/ L(r=0.9993),RSD臆2.4%(n=11),检出限为385 U/ L。 在优化条件下,用白萝 卜提取液作为测试样品,用本方法((9714依132) U/ L)与比色法((9926依352) U/ L)和 循环催化流动分析法((9608依456) U/ L)进行了对比,结果表明,3种方法相互一致性很好。 关键词摇 过氧化物酶;愈创木酚;荧光;白萝 卜提取液 1摇 引摇 言 [1] 过氧化物酶(POD,EC )是一种广泛存在于植物和动物体内的酶,被应用在临床检验 、 [2] [3] [4] 环境监测 、有机合成 和食品分析 等领域,大多数生化试剂盒都含有POD,其最重要的指标就是酶 活性。 因此,POD活性的准确定量尤为重要。 [5] [6] POD能催化酚类或胺类化合物与H O 的反应,常见的显色试剂有邻苯二胺 、季胺 、2,2鄄联氮鄄 2 2 [7] [8] [9] [1,10] 二(3鄄乙基鄄苯并噻唑鄄6鄄磺酸)二铵盐 、邻苯三酚 、愈创木酚(GA) 以及胺和酚类的耦合物 ;这 些反应的产物通过比色法进行检测,但最常用的是低毒性、廉价的GA。 [9] 研究认为,H