多抗性稗草中2个谷胱甘肽转移酶基因的克隆与分析-江苏农业学报.PDF

江苏农业学报（ＪｉａｎｇｓｕＪ．ｏｆ Ａｇｒ．Ｓｃｉ．），２０１５，３１（６）：１２９６～１３０３ １２９６ ｈｔｔｐ：／ ／ ｗｗｗ．ｊｓｎｙｘｂ．ｃｏｍ 杨　 霞，王　 笑，管荣展，等． 多抗性稗草中２ 个谷胱甘肽转移酶基因的克隆与分析［Ｊ］．江苏农业学报，２０１５，３１（６）： １２９６⁃１３０３． ｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１０００⁃４４４０．２０１５．０６．０１６ 多抗性稗草中２个谷胱甘肽转移酶基因的克隆与分析 １ １，２ ２ １ １，２ １ 杨　 霞 ，　 王　 笑 ，　 管荣展 ，　 李永丰 ，　 董明超 ，　 张自常 （１．江苏省农业科学院植物保护研究所，江苏 南京 ２１００１４；２．南京农业大学农学院，江苏 南京 ２１００９５） 　 　 摘要：　 为深入揭示稗草中谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ）对除草剂的解毒机理，本研究通过ＰＣＲ方法从多抗性稗草 中获得了ｐｈｉ类ＥｃＧＳＴＦ１和ｚｅｔａ类ＥｃＧＳＴＺ１基因，并进行生物信息学、基因表达研究及酶活性测定。 系统进化树分 析结果显示稗草ＧＳＴ家族成员与禾本科植物的亲缘关系较近；将ＥｃＧＳＴＦ１和ＥｃＧＳＴＺ１分别插入ｐＥＴ２８ｂ载体中进 行０４ ｍｍｏｌ／ Ｌ ＩＰＴＧ诱导表达，蛋白质分子量大小为２６０００；实时荧光定量ＰＣＲ结果显示ＥｃＧＳＴ在多抗性稗草中 的表达量高于在敏感性稗草，其中ＥｃＧＳＴＦ１基因表达量比ＥｃＧＳＴＺ１高；ＧＳＴ酶比活力分析显示表明未施药处理的 多抗性稗草ＧＳＴ酶比活力高于敏感性稗草，施药７ ｄ后多抗性稗草 ＧＳＴ酶比活力高于敏感性稗草。 综上所述，稗 草中ＧＳＴ酶对除草剂有解毒作用，其中ｐｈｉ类ＧＳＴ更为突出。 关键词：　 稗草；谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ）；基因克隆；原核表达；实时荧光定量ＰＣＲ 中图分类号：　 Ｓ４５１２１　 　 　 文献标识码：　 Ａ　 　 　 文章编号：　 １０００⁃４４４０（２０１５）０６⁃１２９６⁃０８ Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｗｏ ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ Ｓ⁃ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ ｇｅｎｅｓ ｆｒｏｍ ｈｅｒｂｉｃｉｄｅ⁃ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｅｃｈｉｎｏｃｈｌｏａ ｃｒｕｓｇａｌｌｉ １ １，２ ２ １ １，２ １ ＹＡＮＧＸｉａ ，　 ＷＡＮＧＸｉａｏ ，　 ＧＵＡＮ Ｒｏｎｇ⁃ｚｈａｎ ，　 ＬＩ Ｙｏｎｇ⁃ｆｅｎｇ ，　 ＤＯＮＧ Ｍｉｎｇ⁃ｃｈａｏ ，　 ＺＨＡＮＧＺｉ⁃ｃｈａｎｇ （１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆ ＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＪｉａｎｇｓｕＡｃａｄｅｍｙ ｏｆ ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００１４，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｌｅｇｅｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００９５，Ｃｈｉｎａ） 　 　 Ａｂｓｔｒａｃｔ：　 Ｔｏ ａｃｈｉｅｖｅ ａ ｂｅｔｔｅｒ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｔｏｘｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ Ｓ⁃ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ （ＧＳＴ），ｐｈｉＥｃＧＳＴＦ１ ａｎｄ ｚｅｔａＥｃＧＳＴＺ１ ｇｅｎｅｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｆｒｏｍ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｈｅｒｂｉｃｉｄｅ⁃ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ａｎｄ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ ｂａｒｎｙａｒｄ⁃ ｇｒａｓｓ （Ｅｃｈｉｎｏｃｈｌｏａ ｃｒｕｓ⁃ｇａｌｌｉ） ｕｓｉｎｇ ＰＣＲ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅｄ ｕｓｉｎｇ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ． Ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ａｓ