基于表观遗传学探讨补肾中药改善IVF治疗结局的机制研究-中医妇科学专业论文.docxVIP

目 录 引 言 1 第一部分 文献研究 3 一、补肾在辅助生殖领域的应用 3 （一）补肾在辅助生殖领域的临床应用进展 3 （二）补肾在辅助生殖领域应用的作用机制研究进展 5 二、表观遗传学研究进展 9 （一）表观遗传学的基本概念 9 （二）表观遗传学与人类疾病研究现状 11 三、表观遗传学在中医药领域研究进展 12 四、展望 13 第二部分 临床研究 14 一、研究对象 14 （一）病例来源 14 （二）诊断标准 14 （三）病例选择标准 14 （四）IVF-ET 周期前患者准备 15 二、研究方法 15 （一）临床病例分组 15 （二）药物、仪器及试剂 16 （三）方法与步骤 17 （四）观察指标 21 （五）统计学分析 22 三、一般资料 22 （一）两组患者年龄分布比较 22 （二）两组患者病程比较 23 （三）两组患者病史比较 23 （四）两组患者治疗前肾虚证候积分比较 23 （五）两组患者治疗前基础激素水平比较 23 四、研究结果 24 （一）两组患者治疗前后肾虚证候积分变化比较 24 （二）两组患者 Gn 用药支数及天数比较 24 （三）两组患者 HCG 注射日子宫内膜厚度比较 24 （四）两组患者 HCG 注射日子宫内膜分型比较 25 （五）两组患者 HCG 注射日子宫动脉及子宫内膜血流 PI、RI 比较） 25 （六）两组患者 HCG 注射日 E2 水平及及 E2/卵子比较 25 （七）两组患者取卵数、优质卵率、受精率、优质胚胎率比较 26 （八）两组患者生化妊娠率及临床妊娠率比较 26 （九）两组患者着床期子宫内膜 HE 染色结果比较 26 （十）两组患者子宫内膜 DNMT1 比较） 27 （十一）妊娠组与非妊娠组患者子宫内膜 DNMT1 比较 27 第三部分 实验研究 28 一、实验材料 29 （一）实验动物 29 （二）药物及剂量 29 （三）试剂 30 （四）实验仪器 31 二、实验方法 32 （一）造模方法 32 （二）分组与给药 32 （三）标本获取 33 （四）观察指标 33 （五）统计学分析 38 三、实验结果 39 （一）各组小鼠的一般状态 39 （二）各组小鼠的动情周期观察 39 （三）各组小鼠卵细胞母本印迹基因 Snrpn 和 Pegl/Mest 的甲基化测定 39 （四）各组小鼠受精卵数目和卵裂、囊胚形成能力的观察 42 第四部分 讨 论 43 一、 “肾主生殖”与表观遗传学 43 （一）“肾主生殖”理论探讨 43 （二）DNA 甲基化、DNMT1、基因印迹与生殖 46 （三）从表观遗传学角度认识“肾主生殖”理论 51 二、补肾中药改善 IVF 结局的表观遗传学机制 52 （一）补肾之二至天癸颗粒的组方分析 52 （二）补肾中药上调肾阴虚不孕患者着床期子宫内膜 DNMT1 表达 57 （三）补肾中药防止肾阴虚模型小鼠卵细胞 Snrpn 与 Peg1/Mest 基因印迹丢失 63 结 论 67 结 语 68 参考文献 70 综 述 85 附 录 94 致 谢 99 查新报告 100 科研课题 112 发表论文 113 PAGE PAGE 10 引 言 “肾主生殖”是中医学肾藏象学说中的重要组成部分，是对人体生殖功能的基本 认识。在该理论指导下，中医学在治疗生殖疾患方面积累了丰富经验，对中华民族繁 衍昌盛作出了积极贡献。近年来，随着妊娠年龄延后，环境污染加重，人类生殖健康 面临威胁。如何促进人类生殖健康，研究“肾主生殖”理论是当前中医药工作者的重 要任务。随着现代辅助生殖技术的发展与中医药在其中的不断应用，“肾主生殖”的 科学内涵得到不断丰富。卵细胞的发生及排出，胚胎质量及发育潜能，子宫内膜容受 性均与肾中精气的盛衰有密切关系。既往的多项研究已证实补肾中药在提高卵细胞质 量，促进早期胚胎发育，调节子宫内膜容受性等方面的有效性[1-3]，彰显了中医学“肾 主生殖”藏象理论的优势。然而，目前大多数研究仍停留在临床验证和简单的实验研 究阶段，对其科学内涵的研究尚不全面，有待进一步深入探讨。 表观遗传学是研究不涉及 DNA 序列改变的基因表达和调控的学科[4]，表观遗传 修饰在人类卵细胞、精子发生，受精，胚胎着床及发育等过程中起着重要作用[5]。近 年来表观遗传学的研究日趋深入，其成果将有助于人类理解基因表达调控，以及正常 和疾病状态下不同基因相互作用的关系，可为肿瘤等疾病的深入研究提供新的诠释依 据，为环境因素、营养和衰老研究提供新的方法，为药物研发挖掘新的靶标；但未见 从表观遗传学角度对中医藏象理论进行研究的报道。表观遗传学所体现出来的整体 观、动