一步法恒温猪肺炎支原体检测试剂盒使用说明书版本OH02.PDFVIP

《一步法恒温猪肺炎支原体检测试剂盒》使用说明书 (版本OH02) 货号 MHP11 储存条件 该产品在常温下运输，收到产品后请放于-20 ℃保存，该条件下，至少2 年内仍然有活性。 产品用途 《一步法恒温猪肺炎支原体检测试剂盒》主要用于检测活体猪的鼻腔或者猪的肺组织是否携带 猪肺炎支原体 （Mycoplasma hyopneumoniae，M.Hp）。本产品仅用于基础研究。 产品简介 猪支原体肺炎 （mycoplasmal pneumonia of swine，MPS ）是由猪肺炎支原体 （Mycoplasma hyopneumoniae，M.Hp）引发的一种以咳嗽和气喘为主要特征的慢性呼吸道传染病，又称猪气喘病或 者猪地方性肺炎。 猪支原体性肺炎在世界各地广泛传播，以接触性、高度传染性、慢性、高发病率和低病死率为 特点，病猪长期生长发育不良，生长率和饲料转化率降低，感染后引起猪免疫力降低，临床上经常 与多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、猪繁殖与呼吸综合症病毒等病原体混合感染，是猪呼吸道 综合症(porcine chronic respiratory infectious disease，PRDC) 的一个最重要的病原，对养猪 业的危害极大。猪支原体性肺炎的快速诊断对于养猪业意义重大。 猪肺炎支原体的诊断方法主要有：（一）培养法。该方法培养条件苛刻、非常耗时且经常被猪 鼻支原体的过度生长所掩盖。（二）血清学方法。该方法操作复杂、有交叉反应或者动物感染后需 要一段时间才能产生相应的抗体等缺点，不太适合进行疾病的早期诊断和快速诊断。（三）PCR 检测。 但是PCR 法也有明显的缺点：（1）耗时，整个过程大约需要3 个小时； （2）操作复杂，需要专业 人员操作； （3）PCR 产物的电泳，需要用到EB 等潜在的致癌物质；（4）需要用到PCR 仪、电泳槽、 凝胶成像仪、离心机等仪器。 相对于猪肺炎支原体的PCR 法检测， 《一步法恒温猪肺炎支原体检测试剂盒》有如下几个优点： （1）检测时间短，整个检测过程只需 1 小时；（2）操作极其简单，一步即可完成，整个检测过程 完全可以由普通人员完成。 （3）灵敏度高，是PCR 法的10-1000倍，非常有利于疾病的早期诊断； （4）扩增的产物无需电泳，可以通过指示剂的颜色变化直接肉眼判断反应结果；（5）无需用到PCR 仪、电泳槽、凝胶成像仪、离心机等仪器，整个检测过程只需一个水浴锅。 试剂盒组成 （1）反应管，48 个。 （2 ）水化溶液，1.5 mL 。 （3 ）阳性对照DNA，50 μL。 （4 ）矿物油，1.5 mL。 1 / 4 样品的准备 1． 活体猪的鼻拭子样品：使用无菌的棉签，来回蘸取猪的鼻腔分泌物数下，使用无菌的棉签， 来回蘸取猪的鼻腔分泌物数下，此含鼻腔分泌物的棉签即可直接可用于检测。如不立即检 测，样品可于-20 ℃或-80℃保存。 2 ． 猪的肺组织：将新鲜的或-80℃冻存的肺组织，按照常规的哺乳动物组织基因组 DNA 提取 试剂盒或者方法进行提取，最后用灭菌水溶解提取好的DNA （注意：不得使用含EDTA 的 溶液进行溶解！否则会影响恒温扩增的酶活性）。如不立即检测，样品可于-20℃或-80℃保 存。 检测过程 1. 反应：操作之前，请详细阅读后文的注意事项后，再进行操作。 （1）取反应管，分别标记为阳性对照管（Positive ）、测试管（Test ）和阴性对照管 （Negative），而后各加入25 μL 的水化溶液，吹吸数次直到所有冻干粉剂彻底溶解 （冻干品较难溶解，需要缓慢吹吸约 30-50 下。此过程，如有大气泡产生或者小气泡 过多，必须去除，否则严重影响反应结果！气泡的去除方法请见注意事项），将所有 反应管盖子盖上，在另外一个房间内进行下一步的操作。 （2）往阳性对照管中加入 1 μL 阳性对照DNA，而往测试管中加入 1 μL 待测样品，阴性对 照管可以不加。 （3）选择以下方式之一进行反应：① 水浴内反应：往每个反应管内加入25 μL 矿物油，以 防止水份挥发，盖上盖子，将反应管插入带孔的漂