蛋氨酸和甘氨酸的分离与鉴定.DOC

新乡医学院 分析化学 实验课教案首页 授课教师姓名及职称： 一、实验名称 蛋氨酸和甘氨酸的分离与鉴定 二、授课对象 药学 授课形式 实验教学 三、教学目标 1．学习纸层析分离鉴定的原理 2．熟悉纸色谱法的基本操作要求 四、教学内容 1．纸层析分离鉴定的原理 2．纸色谱法的基本操作及注意事项 五、教学安排与课时分配 实验讲解 50min 学生做实验 110min 六、授课重点 1．纸层析分离鉴定的原理 2．纸色谱法的基本操作及注意事项 七、注意事项 1．展开剂须预先配制且充分摇匀 2．用手拿取色谱纸时，应注意位置！ 3．喷显色剂时要均匀、适量 八、授课方法 内容讲解+实验演示 九、使用教材 《分析化学实验》自编教材 十、教研室 审查意见 主任签字 新乡医学院化学教研室 年 月 实验 蛋氨酸和甘氨酸的分离与鉴定 一、实验目的 1．学习纸层析分离鉴定原理。 2．熟悉纸色谱法的基本操作要求。 二、实验原理 本实验中，流动相为正丁醇-冰醋酸-水-乙醇(4:1:1:2)，以上行法展开分离蛋氨酸 (CH3SCH2CH2CH(NH2)COOH)、甘氨酸(NH2CH2COOH)。两化合物结构相似，但碳链长短不同，在滤纸上结合水形成氢键的能力不同。甘氨酸极性大于蛋氨酸，在滤纸上移行速度较慢，因而甘氨酸的Rf值小于蛋氨酸的Rf值。展开后，在60℃下与茚三酮发生显色反应，层析纸上出现红紫色斑点。 三、仪器与试剂 中速层析滤纸（20cm×6cm），毛细管(或微量注射器)，层析缸；0.4g·L-1蛋氨酸，0.4g·L-1甘氨酸，蛋氨酸与甘氨酸混合溶液（1:1），茚三酮显色剂，正丁醇-冰醋酸-水-乙醇(4:1:1:2)。 四、实验步骤 1．供试品溶液及对照溶液的制备 蛋氨酸和甘氨酸标准溶液均为0.4g·L-1水溶液，蛋氨酸与甘氨酸样品的混合溶液作为供试品溶液。 2．点样 取长20cm、宽6cm的中速色谱纸一张，在距底边2cm处用铅笔轻划起始线，在起始线上记3个“×”号，间距为1.5cm，用毛细管(或微量注射器)分别点加上述标准品及混合样品溶液3~4次，斑点直径2mm，晾干(或用冷风吹干)。 3．展开 在干燥的层析缸中加入35mL展开剂，把点样后的滤纸垂直悬挂于层析缸内，盖上缸盖，饱和10分钟。然后使滤纸底边浸入展开剂正丁醇-冰醋酸-水-乙醇(4:1:1:2)内约0.3 ~0.5cm，开始进行展开。 4．显色 待溶剂前沿展开至合适的部位(约15cm)，取出色谱纸，立即用铅笔划下溶剂前沿的位置。晾干后，喷茚三酮显色剂(0.15g茚三酮，加30mL冰醋酸，加50mL丙酮使溶)，置色谱纸于60℃烘箱内显色5分钟，或在电炉上方小心加热，即可看出红紫色斑点，计算Rf值。 五、注意事项 1．展开剂必须预先配制且充分摇匀。 2．点样时每点一次，一定要吹干后再点第二次。斑点直径约2mm。点样次数视样品溶液浓度而定。 3．氨基酸的显色剂茚三酮对体液如汗液等均能显色，在拿取纸时，应注意拿滤纸的顶端或边缘，以保证色谱纸上无杂斑(如手纹印等)。 4．茚三酮显色剂应临用前配制，或置冰箱中冷藏备用。 5．点样用的毛细管(或微量注射器)不可混用，以免污染。 6．点样后的滤纸在层析缸内饱和10分钟时，不可将滤纸浸入展开溶剂内。开始展开时小心将滤纸浸入展开溶剂中，勿使溶剂浸过起始线。 7．喷显色剂要均匀、适量、不可过分集中，使局部太湿。 六、思考题 1．影响Rf值的因素有哪些? 2．在色谱实验中为何常采用标准品对照?