基于功能化介孔二氧化硅载体的漆酶固定化研究-环境工程专业论文.docxVIP

基于功能化介孔二氧化硅载体的漆酶固定化研究学位论文完成日期： 基于功能化介孔二氧化硅载体的漆酶固定化研究 学位论文完成日期： 指导教师签字： 答辩委员会成员签字： 万方数据 青岛科技大学研究生学位论文 青岛科技大学研究生学位论文 基于功能化介孔二氧化硅载体的漆酶固定化研究 摘要 酶在许多领域己得到应用，但游离酶容易受环境影响失去活性，而固定化酶 比较稳定，对抑制剂敏感性低，可以重复使用。 本研究通过实验制备介孔二氧化硅载体，并对其进行表面修饰得到官能化介 孔二氧化硅载体，并以上述载体对漆酶进行固定化。研究不同的官能团(氨基和 乙烯基)和不同固定化方法(交联吸附法和吸附法)对漆酶固定化的影响。通过 考察漆酶的固定量来讨论不同官能团对漆酶固定化的影响；通过测试固定化漆酶 的酶活及其酶活回收率，探讨不同方法对固定漆酶的影响。最后研究固定化漆酶 的性质，并与游离漆酶的性质进行对比分析。 (1)游离白腐真菌漆酶活性测试条件优化。实验结果表明，测定酶活的最 适合条件为：波长600nm、pH值4．0、反应温度30。C、缓冲溶液的浓度O．1mol／L。 动力学曲线：反应1—5min内，反应符合线性方程y=0．0097x．0．0016；随时间增加， 反应速率增加趋势减小，16min反应终止。 (2)官能团对漆酶吸附法固定化影响研究。研究发现，SBA．15的载酶量是 300．2mg／g，SBA-15-NH2的载酶量是176．8mg／g，SBA一15-CH=CH2的载酶量是51．6 mg／g。由此可见，官能团的引入降低了吸附法固定化漆酶的载酶量，尤其是乙烯 基影响显著。 (3)吸附法和交联吸附法漆酶固定化的影响因素研究。在吸附法固定漆酶 的最优条件下(固定时间5h、最适合漆酶浓度0．5mg／mL、最适合反应pH 5)固 定漆酶的酶活是3005U／g，酶活力回收率为60．1％：在交联吸附固定漆酶的最优 条件下(交联时间7h、固定化时间7h、酶浓度1．5mg／mL、戊二醛浓度6％)固 定化漆酶的酶活是3615U／g，酶活力回收率是72．3％。由此可见，交联吸附法优 于吸附法。 (4)固定化漆酶(SBA．15．NH2为载体)与游离漆酶的性质对比分析。固定 化漆酶最适温度是50℃，游离漆酶最适温度是30℃；固定化漆酶最适pH为4．5， 游离漆酶最适pH为4；储存20天后酶活力：吸附法固定漆酶活力为初始69％； 交联吸附法活力为初始的79％：而游离酶活性是原来的29％。吸附法固定化酶的 Km值为0．1 6mmoi／L，交联吸附法固定漆酶的Km值为O．53 mmol／L，游离酶的 万方数据 基于功能化介孔二氧化硅载体的漆酶固定化的研究Km值为O．088mmol／L。因此，固定化漆酶最适温度提高，最适pH略有增大，存 基于功能化介孔二氧化硅载体的漆酶固定化的研究 Km值为O．088mmol／L。因此，固定化漆酶最适温度提高，最适pH略有增大，存 储稳定性增强，酶活性有所减小。 关键词：漆酶固定化介孔二氧化硅氨基乙烯基 万方数据 青岛科技大学研究生学位论文THE 青岛科技大学研究生学位论文 THE PREPARATIoN oF MESoPoRoUS SILICA AND THE IMMOBILIZED LACCASE ABSTRACT Enzyme is widely used in different fields．But free enzyme is easily affected by environment and loses its activity；While the immobilized enzyme is stable，low sensitivity to inhibitors and can be reused． The preparation of mesoporous silica carrier and the surface modification of mesoporous silica carrier and immobilization of laccase were studied in this study．The influe‘nce of functional groups，including amino and vinyl，and different immobilization methods laccase activity was analyzed．The influence of the different functional groups the mesoporous silica carrier was discussed by investigating the enzyme loading By