基于化学成分特征的天麻真伪鉴别及质量评价研究-药物分析学专业论文.docx

成都中医药大学 成都中医药大学 2015 届硕士研究生毕业论文 万方数据 万方数据 摘 要 中药天麻来源于兰科植物天麻 Gastrodia elata Bl. 的干燥块茎；为常用的名 贵中药，也是我国卫生部规定的可用于保健食品的原料。天麻的用量大,货源短 缺，价格高，有以羊角天麻等伪品充当天麻销售的现象，真伪难以鉴别。同时， 在商品流通中，根据天麻的性状特征分为四个等级，还有栽培天麻和野生天麻 之分。这些不同商品规格及等级天麻之间的价格差异很大，但质量优劣不明确。 目前，天麻的真伪鉴别多用传统经验鉴别法，标准化程度低，不易掌握；质量 评价仅以天麻素含量为指标。根据文献报道和课题组前期的研究工作结果表明， 现行的鉴定方法难于有效地鉴别和评价天麻药材的质量。为此，本文运用现代 分析技术，针对天麻的真伪、优劣鉴定开展了以下三方面的研究工作： 第一、天麻药材 HPLC 指纹图谱的建立：通过优化供试液制备方法和色谱 条件，建立了得到分离度良好 HPLC 图谱的方法。对收集的 27 份天麻药材，5 份天麻饮片，3 份天麻粉末和 3 份冷冻干燥天麻样品进行测定，发现这 38 份天 麻样品的 HPLC 图谱相似，具有共同的化学特性；选择 11 个峰为天麻药材 HPLC 图谱的共有峰；经对照品、保留时间和 UV 光谱比较，鉴定了 7 个峰，分别为 天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷 A、巴利森苷 B、巴利森苷 C、巴利森苷 E 和腺苷。再计算这 27 份天麻药材 HPLC 图谱的平均图谱，作为天麻药材的 HPLC 指纹图谱。27 份天麻药材与指纹图谱的相似度大于 0.780；27 份天麻药材的聚 类分析结果表明，除 1 份采收过种子的天麻块茎外，其余样品聚类相对较好。 进一步对双舌蟹甲草（羊角天麻）、洋芋、芋、美人蕉、黄精、红薯、栝楼等 9 份常见天麻的伪品进行比较，发现这些伪品的 HPLC 图谱与天麻 HPLC 指纹 图谱明显不同，未发现天麻素和巴利森苷类成分的峰，且与天麻指纹图谱之间 的相关系数低于 0.042。对 1 份天麻酒的测定结果表明，其 HPLC 图谱与建立的 HPLC 指纹图谱相似，相关系数为 0.966。说明所建立的天麻药材 HPLC 指纹图 谱可准确鉴别天麻的真伪。 第二、天麻药材 FTIR 指纹图谱的建立：通过样品制备和光谱条件优化， 建立了天麻 FTIR 光谱的测定方法。对 27 份天麻药材和 5 份天麻饮片的红外光 谱及其二阶导数光谱的分析结果表明，天麻的红外光谱相似，其特征峰位于 2929, 1642, 1515, 1415, 1371, 1237, 1154, 1079, 1023, 930 和 857 cm-1；并且在 1154, 1079 和 1023 cm-1 的三个峰呈现明显的“阶梯峰”。通过计算 27 份天麻药材 FTIR 光谱的平均图谱作为天麻药材的 FTIR 指纹图谱。32 份天麻药材和饮片在 1800~800 cm-1 范围内的红外光谱与指纹图谱的相关系数大于 0.9771。进一步比 较 15 份冬天麻与 12 份春天麻的红外光谱，发现两者红外光谱峰的强度有明显 区别。春天麻在 1730 cm-1 和 1515 cm-1 附近的吸收峰强于冬天麻，但是，位于 I 1154, 1079 和 1023 cm-1 的“阶梯峰 C”不如冬天麻明显。说明可用 FTIR 指纹 图谱区别冬天麻与春天麻。对双舌蟹甲草（羊角天麻）、洋芋、芋、美人蕉、 黄精、红薯、栝楼等 9 份常见天麻伪品红外光谱的分析表明，这些伪品的红外 光谱中未发现 1515 cm-1 芳香环骨架伸缩振动吸收峰，也多未见 1154, 1079 和 1023 cm-1 的“阶梯峰 C”。说明红外光谱可快速、准确地鉴别天麻的真伪。 第三、天麻商品等级与主要活性成分的相关性研究：首先，通过对样品提取 时间、溶剂、方法、色谱及光谱条件的考察和方法学验证，建立了HPLC测定天 麻素、总天麻素、对羟基苯甲醇、腺苷的方法和苯酚-硫酸法测定天麻多糖的方 法。并针对天麻中天麻素的含量与传统经验鉴别和商品等级划分相关性不显著的 问题，根据天麻素、对羟基苯甲醇、腺苷、多糖在天麻中含量高低及活性大小， 采用加权评分法设置了各成分的权重系数，建立了以天麻素、多糖等为指标成分 综合评价天麻药材质量的方法。其次，对35份冬天麻和11份春天麻进行了比较， 发现两者中天麻素、总天麻素和多糖的含量明显不同（P 0.05）。冬天麻中天麻 素含量（0.45%，n = 35）比春天麻中天麻素含量（0.68%，n = 11）低51.11%， 冬天麻中总天麻素含量（1.98%，n = 35）比春天麻中天麻素含量（2.47%，n = 11） 低24.75%；相反，冬天麻中多糖的含量（26.75