间充质干细胞特化心肌细胞的组蛋白乙酰化修饰调控机制-儿科学(心血管内科)专业论文.docxVIP

重庆医科大学博士研究生学位论文符号说明 重庆医科大学博士研究生学位论文 符号说明 英文缩写 英文全称 中文全称 5．aza 5-azacytidine 5一氮杂胞苷 cDNA Complementary DNA 与mRNA互补的DNA ChIP Chromatin Immunoprecipitation 染色质免疫共沉淀 Cx43 Connexin43 缝隙连接蛋白43 Cy3 Cyanine 3 花青素3 DAPI 4,6--diamidino—·2·—phenyl-·indole 4，6一联脒一2一苯基吲哚 DEPC Diethyl pyrocarbonate 礁碳酸二乙酯 DMEM／F12 Dulbecco’sModifiedEagle 杜氏改良F-12培养基 Mediurn／F12(1：1) EB Ethidium bromide 溴化乙锭 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 眦 Histone 组蛋白乙酰基转移酶 acetyltransferase HDAC Histone deacetyltransferase 组蛋白去乙酰基转移酶 HEPES N-2·-Hydroxyethylpiperazine-N-2·· N一2一羟乙基哌嗪-N-2- eth 乙磺酸 MHC Myosin heavy chain 肌球蛋白重链 MSCs Mesenchymal stem cells 骨髓间充质干细胞 PBS Phosphate buffer solution 磷酸盐缓冲液 RNAi RNA interference RNA干扰 SDS sod．dodecyl sulfonate 十二烷基磺酸钠 s删A short hairpin RNA 短发夹RNA siRNA small interfering RNA 短链干扰RNA 重庆医科大学研究生学位论文独创性声明 重庆医科大学 研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果．据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他 人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构 的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已 在论文中作了明确的说明并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任． 学位论文作者签名：碴塑 日期：＆往8塾生目墨!鱼 学位论文版权使用授权书一．■I-r■．■—，～，■，、‘l，、l_^·，’o t^‘，、 本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学 位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学．本人保证毕业离校后，发表论 文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学。学校有权保留并向国家有关 部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅．学校可以公布学 位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，可以采用影印、缩印或其他手段保 存论文． 论文作者签名： 指导教师签名： 日 重庆医科大学博士研究生学位论文间充质干细胞特化心肌细胞的组蛋白 重庆医科大学博士研究生学位论文 间充质干细胞特化心肌细胞的组蛋白 乙酰化修饰调控机制 摘要 目的： 筛选本课题组前期对Gcn5(组蛋白乙酰基转移酶辅激酶)基因设 计的7条质粒片段中能高效抑制Gcn5表达的shRNA序列；探讨干扰 Gcn5表达后是否能够引起体内组蛋白乙酰化修饰平衡的改变；观测下 调组蛋白乙酰化修饰状态对体内、外MSCs(骨髓间充质干细胞)定 向分化为心肌细胞的影响，从而探讨组蛋白低乙酰化状态对MSCs定 向分化的调控机理；建立通过干预组蛋白乙酰化平衡状态来调节MSCs 定向分化的“基因调节开关”的理论与实验技术平台。 方法： 采用不同组合质粒片段干扰体外培养的MSCs，通过观察细胞形态 变化，ELISA技术检测MSCs细胞核蛋白HAT(组蛋白乙酰化酶)活 性状态，Western．blotting分析MSCs细胞核Gcn5蛋白表达，荧光显微 镜观察质粒转染细胞荧光表达量，流式细胞技术检测质粒转染效率， 筛选有效质粒片段；利用筛选出的有效shRNA转染MSCs，通过ELISA 技术检测MSCs细胞核HAT活性状态，验证通过沉默Gcn5基因是否 能够下调组蛋白乙酰化修饰水平。利用shRNA．ZJ3转染单纯MSCs或 2 重庆医科大学博士研究生学位论文经5-aza(5．氮杂胞苷)处理前后的MSCs，通过观察细胞形态变化， 重庆医科大学博士研究生学位论文 经5-aza(5．氮杂胞苷)处理前后的MSCs，通过观察细胞形态变化， CHIP技术分析乙酰化的组蛋白H3肽链上的相关基因(Gcn5；GATA．4) 表达，透射电镜观测细胞超微结构的变化，