甲烷利用细菌的筛选及可溶性甲烷单加氧酶基因簇的克隆-微生物学专业论文.docxVIP

摘要三氯乙烯(trichloroethylene，简称TCE)在工业上应用很广，是一种优良 摘要 三氯乙烯(trichloroethylene，简称TCE)在工业上应用很广，是一种优良 的溶剂．常用作金属的脱脂剂，脂肪、油、香料和石蜡的萃取剂，各种天然橡 胶、合成橡胶、染料、塑料、沥青的溶剂，也可用作精炼石油、酒精脱水 等。但是，TCE对人体、环境有较大的危害，是控制排放的有机有毒污染 物。 苯胺具致癌作用、致敏作用。苯胺可被皮肤吸收，具有刺激作用。苯 胺还具有致突变性，一次给实验动物1／3一D蚰剂量时，可出现较明显的致 突变作用。苯胺急性中毒造成顽固性贫血，血粘度降低及蛋白质代谢絮 乱。血红蛋白耐力在1—3个月内不能恢复。浓度为3．0和0．3mg／m3的苯 胺可降解红细胞数和血红蛋白水平。接触胺蒸汽时，它可通过人的皮肤和 胃肠道侵入，从而引起中毒。 苯酚是造纸、炼焦、炼油、塑料、农药、医药合成等行业生产的原料 或中间体。随着经济的发展，未经处理的含酚废水对人类的生存环境已经 造成了严重的威胁。利用微生物降解的方法处理含酚废水是一种经济有效 且无二次污染的方法。 本研究利用传统微生物学的方法，从南宁市广西大学田的土样中筛选 到一株甲烷利用细菌Y2(83)，能够在以甲烷为唯一碳源和能源的无机培 养基上生长，通过形态观察及16SrRNA编码序列同源性比较分析，我们 初步鉴定该菌株为甲基孢囊菌。通过对Y2(83)菌株在不同温度、pH值条 件下的生长的情况，我们初步确定了Y2(83)的最适生长和降解苯酚的温 度为32℃，最适pH值为7．0，TCE最高的耐受浓度为30mg／L．苯胺最高 的耐受浓度为1500mg／L．苯酚最高的耐受浓度为800mg／L． 根据可溶性甲烷单加氧酶(sMMO)所共有的保守序列设计合成了一对 引物，以Y2(83)总DNA为模板，通过PCR反应，扩增出242bp的同源 片段。对该DNA序列测序，并通过序列分析表明，该片段与已报道的可 溶性甲烷单加氧酶的编码基因中的mmoX有85％的同源性。以此DNA 片段为探针，通过Southern blot的方法，从用部分酶切的Y2(83)总DNA 中获得阳性印迹，确认其可溶性甲烷单加氧酶的编码基因的位置，进而构 建了Y2(83)可溶性甲烷单加氧酶的编码基因文库。通过菌落原位杂交， 找到一个含有可溶性甲烷单加氧酶的编码基因的阳性克隆，为进一步研究 可溶性甲烷单加氧酶工程菌打下基础。 关键词：TCE【三乙烯】；苯胺；苯酚；生物降勰：降解基因；sMMO；甲浚零霉角细菌；霹溶往晕烷攀翔氧酶 关键词：TCE【三乙烯】；苯胺；苯酚；生物降勰：降解基因；sMMO；甲 浚零霉角细菌；霹溶往晕烷攀翔氧酶 广西大学硕士学位论文ABSTItAC’11 广西大学硕士学位论文 ABSTItAC’11 Trichloroethy’lene is a soluble substance which is used in industry．but it was poison to people’s health．Aniline Is a important raw material substance in the industry．but it can cause animal and the mankind disease throu【gh many kinds of way such as suckitortouchit．． Phenol is the important raw material or midst substance of paper making、coking plant、oil refining、plastic、pesticide and medicine composing etc．More and more phenol wastewater without treatment is threatening the environment heavily with the development of economy．It is economic and effective that using the method of microorganism biodegradation to treat with phenol wastewater．And it has not second pollution too． A strain that can grow with phenol as the sole source of carbon and energy,Y2(83)， was isolated from the soil samplesin the GuangXi