甲状腺相关性眼病眼眶成纤维细胞亚型与功能研究-眼科学专业论文.docxVIP

声 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别如以标注和致谢的地方外，论文中不包含 其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四Jl}大学或其他教育机 构的学位或证书丽使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡 献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 本学位论文成果是本人在四Jl|大学读书期间在导师指导下取得的，论文成 果归四川大学所有，特此声明。 申请人：愿韵 指导教师： 四川大学临床医学博士学位论文缩略词表 四川大学临床医学博士学位论文 缩略词表 缩写词 英文名称 中文名称 Thyroi d aSSOC iated TAO 甲状腺相关眼病 ophthal瑚opathy OF orbita]fibroblast 眼眶成纤维细胞 GAG gl ycosami nogiycans 糖胺多糖 IgSF immunoglobul in superfami 1Y 免疫球蛋自超家族 GPI glycophosphatidylinosito] 糖磷脂酰肌醇 FACS flow cytometry 流式细胞术 MACS magnetiC eeil sorting system 免疫磁珠细胞分离法 BSA bovine serum albumin 牛血清白蛋白 d—SMA d—smooth muscle acti rl a平滑肌动蛋白 肌纤维母细胞 MFB myofibroblast 肌成纤维细胞 四川大学临床医学博士学位论文transforming 四川大学临床医学博士学位论文 transforming growth factor beta TGF-0 1 转化生长因子p 1 ECM extracellular—matrix 细胞外基质 1ipo—FB lipofibroblast 脂成纤维细胞 IOD integral optical density 积分光密度 CTGF connecti ve tissue growth factor 结缔组织生长因子 HAS hyaluronan synthase 透明质酸合成酶 PGE2 Prostaglandin E2 前列腺素E2 COX2 Cyc 1 ooxygenase 2 环氧化酶 IgSF imanunoglobulin superfamiiF 免疫球蛋白超家族 Glyceral dehydes——3——phosphate GAPDH 甘油醛一3一磷酸脱氢酶 dehydrogenase HA hyaluronan 透明质酸 3一异丁基一卜甲基黄 IBMX 3一isobutyl一1—1methylxanthiDe 嘌岭 2 四川大学临床医学博士学位论文中文摘要 四川大学临床医学博士学位论文 中文摘要 甲状腺相关性眼病眼眶成纤维细胞 亚型与功能研究 导 师：罗清礼 博士研究生：唐 莉 目的 甲状腺相关眼病的病理改变包括眼外肌纤维化、糖胺聚糖积聚、眶脂肪 容积增多。本研究旨在检测培养的眼眶成纤维细胞是否存在不同的表型，表 达CD90抗原有差异，并依据是否表达CD90分为两个亚群，分离这两个细胞 亚群，分别进行肌成纤维和脂成纤维细胞诱导，研究他们在眼外肌纤维化、 脂肪堆积和有害的炎症中所起的不同的作用，从而解释甲状腺相关眼病的一 系列临床病理改变，证实成纤维细胞是甲状腺相关眼病的关键效应细胞，有 着高度严格的分工，并为进一步阐明甲状腺相关眼病的发病机理提供新思 路，为将来研制能阻断脂肪积聚或眼外肌纤维化的药物或蛋白用以有针对性 地治疗该病提供理论依据。 方法 1．培养TAO病人和正常对照眼眶成纤维细胞，流式细胞术检测CD90的表达。 2．免疫磁分离法分离CD90+和CD90的眼眶成纤维细胞，免疫细胞化学法和流 式细胞术鉴定。 3．TGF—B 1诱导CDgO+和CD90一成纤维细胞亚群转化为肌成纤维细胞(MFB)， 免疫细胞化学法检测代表MFB标志的平滑肌动蛋白n—SMA的表达情况。 删川大学临床医学博士学位论文4．分别诱导CD90+和CD90一成纤维细胞亚群转化为脂成纤维细胞，比较转化 删川大学临床医学博士学位论文 4．分别诱导CD90+和CD90一成纤维细胞亚群转化为脂成纤维细胞，比较转化 率。 5 RT—PCR法检测MFB诱导过程中CD90+和CD90一成纤维细胞亚群表达代表MFB 标志的o～SMA mRNA、TGF—B 1的下游基因结缔组织生长因子CTGF mRNA 的情况，分析时间和剂量效应关系。 6．RT—PCR法检测MFB诱导过程中CD90+和CD90一成纤维细胞亚群表达与糖胺 聚糖合成相关的透明质酸合成酶基因HASl、HAS2、HAS3，与炎症相关的环 氧化酶COX2基因表达的影响，更进一步了