简易型微流控芯片的研制及其在临床诊断中的应用-临床检验诊断学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 学位论文独创性声明 学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学 或其他教育机构 的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均 已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名（手写）： 签字日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借 阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中 国科学技术信息研究所和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录 到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全 文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。 （保密的学位论文在解密后适用本授权书） 学位论文作者签名（手写）： 导师签名（手写）： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 Ⅰ 摘要 摘要 摘 要 研究目的 针对微流控芯片光刻制作工艺中存在的过程繁琐，实验条件要求高、设备成 本高等问题，本研究采用激光雕刻机在双面粘性薄膜上雕刻流体通道，以聚二甲 基硅氧烷（PDMS）为盖片、双面粘性薄膜（DSA）为流体通道层、玻璃为基片， 以研制一种低成本、易制作、便携式的 PDMS-DSA 微流控芯片，并应用于循环 肿瘤细胞的捕获富集及食品中大肠埃希菌 O157:H7的检测。 研究方法 1、研制简易型微流控芯片检测系统： 采用计算机辅助软件（Pro/Engineer5.0, ProE 5.0）设计简易型微流控芯片 CAD 图形，采用激光雕刻技术在双面粘性薄膜上按照设计图形切出流体通道， 再将激光雕刻后的双面粘性薄膜与 PDMS 及玻片封接制成 PDMS-DSA 微流控芯 片，将制备好的微流控芯片与注射泵、注射器、荧光倒置显微镜和 CCD 等设备 连接，建立自动化的简易型微流控芯片反应系统。 2、简易型微流控芯片的表面修饰和抗体固定方法的优化： 以巯基-马来酰亚胺基团硅烷化偶联法为芯片的表面修饰方法，以链霉亲和 素-生物素亲合法为芯片的抗体固定方法，通过比较不同反应时间、进样流速等 实验参数，优化出简易型微流控芯片中抗体的最佳反应条件。 3、简易型微流控芯片在循环肿瘤细胞捕获富集中的应用： 以简易型微流控芯片检测系统为平台，以乳腺肿瘤细胞（ATCC MCF-7 和 MDAMB231肿瘤细胞）为研究对象，在最佳抗体固定条件下，通过比较不同进 样流速、抗体浓度及反应时间，建立基于简易型微流控芯片的循环肿瘤细胞捕获 富集方法，并将此方法应用于模拟肿瘤患者外周血样本的检测。 4、简易型微流控芯片在大肠埃希菌 O157:H7检测中的应用： 以简易型微流控芯片检测系统为平台，以最佳抗体固定参数固定抗体，在此 基础上，以免疫荧光技术为检测手段，优化最佳进样流速、检测时间，建立基于 简易型微流控芯片大肠埃希菌 O157:H7检测方法，并将此方法应用于牛奶及饮用 水模拟污染样本中大肠埃希菌 O157:H7的检测。 研究结果 1、使用激光雕刻机可在1分钟内同时雕刻8-10个双面粘性薄膜，并在1分钟 Ⅱ 完成简易型微流控芯片的制作，整个制作过程中无需使用超净间、光刻机和有机 溶剂。以此芯片与荧光倒置显微镜检测器和 CCD 连接，成功搭建了低成本、自 动化的简易型微流控芯片检测系统。 2、在进样流速为2μl/min 时，未经表面修饰直接通入生物素标记的 EpCAM 抗体的芯片对 MCF-7肿瘤细胞的捕获率为3%，而经过表面修饰再通入生物素标 记的 EpCAM 抗体的芯片对 MCF-7肿瘤细胞的捕获效果明显更高，为(92±3)%。 3、在 EpCAM 抗体浓度为 10mg/ml，反应时间为 1h，进样流速分别为 2μl/min、 4μl/min、6μl/min 和 8μl/min 时，基于简易型微流控芯片系统对 MCF-7 肿瘤细胞 的捕获率分别为(92±3)%、(60±2)%、(24±2)% 和 (10±2)%，对 MDAMB231 肿瘤细胞的捕获率分别为(75±3)%、(52±2)%、(20±3)% 和 (7±2)%。可见， 两种肿瘤细胞在进样流速为 2μl/min 时捕获率最高。将此方法应用于模拟肿瘤患 者外周血样本的检测，在进样流速为 2μl/min、4μl/min、6μl/min 和 8μl/min 时， 基于简易型微流控芯片系统对肿瘤细胞的捕获率分别为(88±3)%、(50±2)%