甲鱼VB17检测及VB17与β-葡萄糖苷酶联合应用的抗肝癌作用研究-动物营养与饲料科学专业论文.docxVIP

甲鱼VBl7检测及VBl7与p．葡萄糖苷酶联合应用 甲鱼VBl7检测及VBl7与p．葡萄糖苷酶联合应用 的抗肝癌作用研究 研究生：张晓旭 导师：赵国琦教授 钱利纯副研究员 (扬州大学动物科学与技术学院，225009) 摘要 本试验采用超声波乙醇浸提法从甲鱼体内粗提VBl7，利用HPLC法 对提取液进行定性、定量分析；同时通过体内外试验研究VBl7被叠．葡萄 糖苷酶激活的抗肝癌效果，探讨了VBl7的抗肝癌机制，为甲鱼抗癌保健 品的开发提供研究思路及理论依据。 l、利用HPLC法对甲鱼浸提液进行定性、定量分析。结果表明，在 乙醇浓度为90％，料液比1：15，超声波温度20。C，超声时间30mm的 条件下，甲鱼体VBl7的含量可达1 0．46mg／kg。 2、体外培养人肝癌HepG2细胞，观测VBl7与B．葡萄糖苷酶联合应 用诱导细胞凋亡的作用。MTT法检测发现VBl7与B。葡萄糖苷酶联合应 用的效果要明显的优于VBl7单独作用，随着药物浓度的增加和作用时间 的延长，其对HepG2细胞增殖的抑制率增加；显微镜下观察发现随着药 物浓度的增加和作用时间的延长，细胞开始变圆、皱缩，贴壁细胞的数量 越来越少，14mg／mL组细胞己呈现出典型的坏死状；AO／EB荧光染色法 观察表明凋亡细胞数随着VBl7浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增 多，各实验组的细胞凋亡率与对照组相比差异极显著(尸0．01)；Annexin V-FITCfPI双染流式细胞术分析结果显示细胞凋亡率随VBl7浓度增加和 作用时间的延长而逐渐增高，VBl7添加组的细胞凋亡率与对照组间，存 在极显著差异(P0．01)。 3、建立裸鼠HepG2细胞株移植瘤模型，观测vBl7体内抑瘤效果。 结果表明：高(60mg／mL)、qh(30mg／mL)、低(15m咖L)剂量灌胃组及腹腔 注射(60mg／mL)组相对肿瘤体积和瘤重均小于对照组，抑瘤率分别为 58．30％、45．64％、5．81％和14．73％，中、高剂量组抑瘤率显著的高于对 照组(尸O．01)；相同浓度药物，腹腔注射组的抑瘤率显著的低于灌胃组(氏0．QI)。 照组(尸O．01)；相同浓度药物，腹腔注射组的抑瘤率显著的低于灌胃组 (氏0．QI)。 4、通过观测裸鼠日常行为和日增重等指标，探讨VBl7对机体的毒副 作用。结果表明腹腔注射组和低剂量灌胃组与对照组裸鼠比较在日常行为 和日增重方面并无显著差异(p0．05)，高剂量灌胃组荷瘤小鼠日增变化 较大，比对照组减少了94．09％(P0．01)，比腹腔注射组减少了93．66％ (氏O．01)。中剂量灌胃组的日增重与对照组、腹腔注射组和低剂量组相 比分别降低了15．69％、20．15％和23．21％(P0．05)。 关键词：甲鱼：VB B一葡萄糖苷酶：HepG2细胞：凋亡：抑瘤 Detection Detection of Vitamin B】7 from Turtle and the Research of Anti．．Hepatic Carcinoma Activiy of Vitamin B 1 7 following Specific Activation by B—glucosidase Postgraduate：Zhang Xiaoxu Advisor：Prof．Zhao Guoqi Associate prof．Qian Lichun (College ofAnimal Science and Technology,Yangzhou University,225009) AB STRACT The ultrasonic extraction technology was used in the study for extracting vitamin B I 7 from turtle，and then qualitative and quantitative analysis by HPLC．Research of anti—hepatic carcinoma effect of vitamin B1 7 following specific activation by p—glucosidase on human hepatic cancer HepG2 cells in vitro and in vivo，and to analyze its possible mechanism，offering experimental data for exploring the turtle health care products． 1．Using HPLC to analysis the extracting solution from turtle．ne r