甲状旁腺激素间歇性作用对大鼠成骨细胞分泌蛋白谱的影响-内分泌专业论文.docxVIP

南京医科大学硕士学位论文论文使用授权声明 南京医科大学硕士学位论文 论文使用授权声明 本人完全了解南京医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即： 学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公 布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论 文。保密的论文在解密后遵守此规定。 储签名：丝导师签名：)]么日期．砭2．．形． 南京医科大学硕士学位论文中文摘要 南京医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的：PTH是体内调节钙平衡和骨代谢的重要激素，近年来大量的 动物和临床研究显示PTH间歇性刺激具有促进骨形成的作用，但其作用 机制尚不完全清楚。本研究通过蛋白质组学方法研究PTH间歇性刺激对 体外培养的大鼠成骨m胞(ROB)分泌蛋白谱的影响，试图沿着PTH对成 骨细胞作用途径寻找新的骨代谢调节因子，为进一步研究PTH促成骨作 用机制和研制新的促成骨药物打下基础。 方法：采用酶消化法原代培养大鼠成骨细胞，在传代后24小时，将 培养的细胞分为PTH刺激组(I协1)和对照组(c砷，刺激组用50n,rid 蹦(1—34)间歇刺激3个周期，即在每个周期24h中，仅在前6h用含50 ng／ml PTH(1．34)的DMEM培养液孵育细胞．第三周期采用无血清培养液 培养后分别收集6h末和24h末两组细胞的培养液。用透析法一丙酮沉淀 法富集培养液中的蛋白质，制备双向电泳(2．DE游品，进行2-DE实验。 通过2-DE图象分析软件比对两组细胞分泌蛋白的2-DE图谱，寻找差异 蛋白，再通过基质辅助激光解吸离子化一飞行时问质谱 (MALDI．TOF．MS)进行质谱分析，得到蛋白的肽质量指纹图谱(PMF)， 然后用Mascot软件查询Swiss．Prot数据库，鉴定蛋白的种类和性质。 结果：我们获得了质量较高的成骨细胞分泌蛋白的双向电泳图谱． 经过ImageMaster 2D 5．5软件比对发现，6h末P1H刺激组(I吼6h削照 组(ctf6h)有34个差异表达蛋白，24h末刺激组(ItIn24啦对照组(ctr24h) 有35个差异表达蛋白。我们分别选取了Itm6h组的8个差异表达蛋白(4 个表达上调，4个表达下调)，Itm24h组的15个差异表达蛋白(11个表 达上调，4个表达下调)进行质谱分析，鉴定结果显示Itm6h组表达上调 的4种蛋白分别为Ubiquitin specific protease 14，Chloride intracellular 南京医科大学硕士学位论文channel 南京医科大学硕士学位论文 channel protein 4，Vtmentin，Eukaryotic translation initiation factor 5A-1，4个 表达下调的蛋白质分别是：Neurokinin-B precursor,AJ【pha-2 antiplasmin (Serine(Or cysteine)peptidase inhibitor,clade F’member 1)，Heat shock cognate 71 kDa protein，Clr protein。Itm24h组表达上调的11个蛋白分别 是：Vimentin，Glyceraldehyde一3-phosphate dehydrogenase，Rho GDP dissociation inhibitor(GDI)alpha，FK506-binding protein 1丸脚ate kinase isozymes MI／M2，Inositol monophosphatase，(IMPase)，IGFBP一2， Proteasome subunit alpha type 3，Superoxide dismutase【Cu—Zn]，表达下调的 4个蛋白分别是：Glutathione peroxidase l(GSHPx-1)，Metalloproteinase inhibitor 2 precursor(TWW·2)，Transgelin，Alpha-2 antiplasmin(Serine(Or cysteine)peptidase inhibitor,clade F，member 1)。这些差异蛋白按功能分类 主要属于细胞骨架蛋白、翻译调控相关蛋白．蛋白降解相关蛋白、信号 转导相关蛋白、热休克蛋白／分子伴侣、抗氧化酶及与糖、脂代谢相关的 蛋白。 结论：通过蛋白质组学研究方法，我们发现在PTH间歇刺激下大鼠 成骨细胞的分泌蛋白谱中有多种蛋白表达发生改变，其中有些蛋白是首 次发现的成骨细胞分泌蛋白，为进一步研究PTH促成骨机理提供了可靠 的依据。 关键词：甲状旁腺激素；成骨细胞；蛋白质组；分泌组；双向电泳 南京医科大学硕士学位论文英文摘要 南京医