具有高谷胱甘肽合成活性重组大肠杆菌的构建及合成反应-微生物学报.PDF

卷 期 微 生 物 学 报 ! %’(! 0( 年 月 #$$ # !#$%’()(*($,-$ )*+,-., #$$ + / !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 具有高谷胱甘肽合成活性重组大肠杆菌 的构建及合成反应过程 # 李华钟 李 寅 林金萍 陈 坚 # （无锡轻工大学生物工程学院 无锡 ） （华东理工大学生物工程学院 上海 ） #!$; #$$;4 摘 要：以野生型大肠杆菌!#$%为宿主细胞，转化带有编码谷胱甘肽合成酶系的基因 和 的质粒 ，获得了一株谷胱甘肽合成活性、质粒稳定性和传代稳定性俱 # () () ?2$ ’ ’ = 佳，并且能够重复使用的重组大肠杆菌 。该菌株经过甲苯处理后，能够在胞外积 !#$%: 累 ／ 左右的谷胱甘肽（ ）。在合成反应体系中，提高 谷氨酸浓度可促进 合成， ! A 5? A: 5? @ 但 半胱氨酸浓度增大到 ／ 后会抑制 的合成。根据 合成反应中能量辅 A: #$BB’A 5? 5? 因子的变化情况，提出 细胞控制的 合成反应机理：由谷胱甘肽合成酶（ !#$%: 5? 5?: ）控制的第二步反应的能量供体是 而非 ，该反应是整个 合成反应的限速步 CDE CFE 5? 骤，高浓度 可能会抑制 的活性。在 合成反应体系中添加 ／ 的 CDE 5?: 5? $$BB’A A: 丝氨酸 硼酸钾混合物，可以有效地防止 的进一步降解，反应 后， 产量达到 G 5? ;7 5? ／（约 ／）。 #;H$BB’A 4H A @ 关键词：谷胱甘肽，重组大肠杆菌，构建，生物合成，反应机理 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） FI!!H4 C $$$:#$1 #$$ $:$$:$1 谷胱甘肽（ ）由于具有解毒、抗衰老和抗氧化等重要的生理功