腱组织提取物对大鼠脂肪来源间充质干细胞增殖和向肌腱细胞分化的影响-外科学(骨科)专业论文.docxVIP

洲Y 洲Y 叭4●洲9 川m1 帆7㈣8Ⅲ3 吣6 分类号VDC 密级 硕士学位论文 腱组织提取物对大鼠脂肪来源间充质干细胞增殖和向 肌腱细胞分化的影响 Proliferation and di仃erentiation of rat adipose．derived stem cells using extracts of rat tendon tissues 研究生： 刘刘 学科专业： 外科学(骨科) 学 院： 湘雅二医院 导 师： 倪江东 教授 论文答辩日期之妇：工：婷辩委员会主席 中 南大 学 二。一一年五月 原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研 究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和 致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成 果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的 材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在在论文中作 了明确的说明。 作者签名： 出出 关于学位论文使用授权说明 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文， 允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内 容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科 学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》， 并通过网络向社会公众提供信息服务。 作者签名：玉出导师签名：色!!!日期：三碰年』月如作者签名：出出导师签名：型!!!日期：三碰年』月如 摘要研究目的 摘要 研究目的 探讨腱组织提取物对ADSC增殖和向肌腱细胞方向分化的影响， 从而为肌腱组织工程及其最终应用于临床提供理论依据。 研究方法 从3周龄SD大鼠腹股沟脂肪垫分离出脂肪组织，通过I型胶原 酶消化法分离干细胞，接种于含有胎牛血清的DMEM培养基中分离 传代。每日以倒置显微镜观察细胞形态及生长情况，MTT法绘制 ADSC生长曲线。经鉴定后，取第三代ADSC分成实验组和对照组2 组，利用腱组织提取物处理实验组ADSC，Halll(’s液处理对照组细胞 后继续培养观察。采用MTT比色法进行增殖活性比较，I型胶原免 疫细胞化学染色检测成肌腱分化情况以及RT-PCR检测肌腱发育相关 基因(Collagen I、CollagenIⅡ基因)的表达。 研究结果 原代细胞接种4．6小时后即可见沉降贴壁，7．8天左右可见大量 增殖，按一定方向性排列，呈漩涡状或束状，传代后细胞增殖迅速， 生长稳定。腱组织提取物诱导后，MTT实验显示ADSC增殖活性并 未发生明显改变，与对照组间没有统计学差异(础．05)。行I型胶原 免疫细胞化学染色显示：实验组为阳性，对照组阴性；lmPCR检测 显示肌腱发育相关基因(Collagell I、CollagenIII基因)表达明显增 加(p0．01)。 研究结论 研究结论 1．腱组织提取物不能改变大鼠ADSC的增殖活性 2．腱组织提取物可以促进大鼠ADSC向肌腱细胞方向分化 关键词腱组织提取物，脂肪来源间充质干细胞，增殖，分化 H AB AB STRACT obj ectiVe： Tb inVestigate t11e innuence to the pr01if酬on and its dif五erentiation to tendon cells of ADSC when仃eated、析th tendon tissues ex仃acts，then proVide a scientific basis f．0r tendon tissue engineering and its ultimate clinical印plicatiOn． MethOds： 3 weeks old SD rats，isolate adipose tissue疔om its inguin矾fat padS， theIl isOlate st锄cells by Collagen弱e I digestion，seeded tlle stem cells in DMEM medium which contains fetal bo访ne serum f．0r separation and subculture． ObseⅣe t11e cen mo印hology and伊。叭h by invened Inicroscope daily，MTT method to draw ADSC gro、Ⅳtll Curve．After identi6ed，take the mird generation of ADSC and dMde it int0 the exp