芥蓝黑芥子酶基因的克隆与原核表达-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

福建农林大学硕士学位论文 缩写词汇表 缩写名称 英文全称 Aabsolbance A PM 川 Mabridged anchor primer 组npicílin 叩 P M 川 M 翩abridged universal amplifi创m抖mer 翩 坤base pairs 坤 A删d∞mplemen出yDωxyribo Nucleic Acíd A 删 d mmm mmmmM mωH m P Cd臼xynucl四位de 创phosphate Diet1亨lpyr但arbonate Deoxyribonucleic P C - AmDiηlio币treiωl Escherichia colí ethidium - A m ethylene-diantìne-tetra-acetic IWid mgenes严cific primer hour m isopropyl-1-由io- -D-gal机ωside 阳mm 刷 刷 阳 mm 刷 刷 ALuria-Bertanì mmute minilitre minimolar A 刷messenger RNA 刷 ∞Optical Density ∞ 侧 m。阳n reading 侧 m Mpolymerase chain reaction M E肌rapíd antplification of cDNA ends ribonucleic 3Cid E 肌 阳rounds per minute 阳 如 MS伐 如 M J肿 州WThermus 间回，tius DNA(pol归臼回se) universal 部nplifiωlion primer J肿 州 W micromolar 州5-bromo4-chloro-3-indolyl- D-galact 叩严部跚地 州 3 福建农林大学硕士学位论文图表清单 福建农林大学硕士学位论文 图表清单 图1芥蓝图片 9 图2硫代葡萄糖苷的结构 一1l 图3异硫氰酸盐防癌抗癌作用示意 12 图4异硫氰酸盐的合成与代谢 14 图5黑芥子酶基因原核表达载体的构建 3l 困6芥蓝总RNA的电泳图 ．．37 图7 RT-PCR的扩增产物电泳图 38 图8 3’RACE巢式PCR产物电泳图 39 图9 5’RACE巢式PCR产物电泳图 39 图10编码序列扩增产物的电泳图 40 图11芥蓝黑芥子酶基因核苷酸序列的Blast结果 43 图12芥蓝黑芥子酶基因编码的氨基酸序列的Blast结果 “ 图13黑芥子酶基因推导的氨基酸保守结构域预测 45 图14芥蓝黑芥子酶SignalP-Neuralnetworks分析 45 图15芥蓝黑芥子酶SignalP-HiddenMarkovmodels分析 46 图16芥蓝黑芥子酶的三维结构 46 图17重组质粒pETmyr的PCR及酶切鉴定结果 47 图18 SDS电泳检测重组蛋白在BL21中的表达 48 表1几种常见的硫代葡萄糖苷及其对应的异硫氰酸盐 lO 表2芥蓝黑芥子酶基因的全长eDNA序列 41 表3芥蓝黑芥子酶基因核苷酸序列推导出的氨基酸序列 42 4 独创性声明本人声明，所呈交的学位(毕业)论文，是本人在指导教师的指导下独立完 独创性声明 本人声明，所呈交的学位(毕业)论文，是本人在指导教师的指导下独立完 成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知。除了文中作了标注和致谢中已作 了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本 研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯 他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位c㈨论文储亲笔签名诼网驾吼御。f 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位(毕业)论文的规定，即学 校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或 部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密，在 年后解密可适用本授权书。 口 不保密，本论文属于不保密。 口 学位(毕业)论文作者亲笔签名：撕驾 日期； r＼ 参，I 指导教师亲笔签名； 日期： 坍7r／ 占．／ 福建农林大学硕士学位论文摘要 福建农林大学硕士学位论文 摘要 异硫氰酸盐(Isothiocyanates，ITCs)中的萝卜硫素是迄今为止蔬菜中发现 的最强抗癌成分．萝卜硫素前体物质4一甲基硫氧丁基硫苷的含量在芸薹属蔬菜 中以芥蓝中最高．异硫氰酸盐以阻遏和抑制致癌因子而发挥抗癌作用．此外，异 硫氰酸盐还有抗茵，防腐和抵御植物病虫害的能力．黑芥子酶(Myrosinase)是 异硫氰酸盐合成的关键酶，天然的异硫氰酸盐是由黑芥子酶水解硫代葡萄糖苷 (Olucosinolates)产生的． 本研究采用eDNA末端快速扩