金花茶离体培养研究-园林植物与观赏园艺专业论文.docxVIP

摘 摘 要 摘 要 本试验以金花茶成年植株的茎段为外植体，进行了比较系统的离 体器官发生和体细胞胚胎发生研究，并采用SDS．PAGE方法分析了体 胚发生过程中蛋白质组分变化。主要研究结果如下： 1．建立了金花茶成年茎段离体器官发生再生体系。试验结果表 明：分段消毒法是较为理想的消毒方式：附加2 mg‘L。1 BA及0．5 mg·L。 IAA的改良WPM培养基适合诱导腋芽萌发，萌发率达57．1％；芽苗 在附加3 mg·L。1 BA及0．2 mg·L。1 IAA的改良WPM培养基上增殖效 果较好；在附加4 mg·L“或6 mg·LdNAA的1／2MS培养基上可诱导芽 苗生根。 2．首次从金花茶成年茎段诱导体胚发生，建立了循环的体胚增殖 系统、体胚成熟与萌发处理方法。 金花茶成年植株茎段在附加2 mg·L。1 BA和0．5 mg·L。1 NAA的MS 培养基上培养80d后直接产生体胚，并以形成次生胚的方式增殖。 金花茶体胚增殖系统的维持有3条途径：①途径I：可以进行球 形胚发育及早期子叶胚的继代增殖，但继代增殖次数有限：②途径II： 可以进行除球形胚以外各类体胚的长期继代增殖，增殖率较高，但体 胚高度不同步化；③途径III：可以进行大子叶胚的长期继代增殖，次 生胚大都处于大子叶胚阶段。实现这3条途径的最佳培养基分别为： 改良ER+0．7 mg-L～2,4．D+30 g．L。1蔗糖；改良ER+0．1 mg·L‘1 NAA +3 mg·L。1 BA+30 g．L’1山梨醇；MS+40 g-L‘1蔗糖-t-20 g-L1山梨醇。 3条增殖途径相互联系，会形成一个循环的体胚增殖系统，能够长期 维持。 金花茶体胚成熟要分两步进行。首先，小子叶胚在附加40 g-L。1蔗 摘 摘 要 糖、20 gL。1山梨醇的无激素MS培养基上过渡成熟，形成大子叶胚； 然后，再把大子叶胚转移到附加60 gL‘1蔗糖的无激素MS培养基上 进行培养，体胚逐渐完成正常的成熟过程。在过渡成熟中，可以同时 实现大子叶胚的增殖。 金花茶成熟体胚在附加2 mg-L。1 BA及0．2 mg·L‘1 NAA的改良 WPM培养基上可以萌发成苗，成苗率较高，并且再生植株长势较好。 3．首次对金花茶体胚发生过程中不同类型的体胚进行系统分类。 根据体胚的形态特征及萌发情况将这些体胚分为『F常胚、子叶畸形 胚、连体胚、多芽胚状体及玻璃化胚5大类。花状多子叶胚是其中一 类较为特殊的子叶畸形胚，其继续发育会分化出一些“子叶状叶片”， 这类“子叶状叶片”在一定培养条件下又会逐渐转换为真叶，这种现 象在其它植物体胚发生中未见报道。 4．金花茶体胚发生发育过程中蛋白质SDS．PAGE分析表明：无论 是胚胎发生阶段还是胚后发生阶段都存在着一组相关的特异蛋白。成 熟胚与其它5个阶段(球形胚、早期子叶胚、大子叶胚、萌发胚、再 生植株)相比，无论在蛋白质组分还是蛋白质含量上都明显较少，同 时出现了分予量分别为25．3 kD、24．6 kD的2个特异蛋白，推测这两 个蛋白与金花茶体胚成熟密切相关。 关键词：金花荼：成年茎段：离体器官发生；体胚发生；特异蛋白 英文摘要In 英文摘要 In vitro culture of Camellia nitidissima Chi． Abstract m this experiment．the relatively systematic research of organogenesis in vitro and somatic embryogenesis from the stem segments of adult trees was ea”ied out in Camellia nitidissima，and then the changes of protein components during the development of somatic embryogenesis were analyzed by SDS．The main results were as foIlows： I．The system of organogenesis in vitro from the stem segmenls of adult trees was established in Camellia nitidissima．The results showed that the effective method of surface sterilization for the explants was discontinuous sterilization；the modified solid WPM medium supplemented with 2．0 mg·L