金地灵芝液态发酵产灵芝多糖条件优化及其发酵产物功能的研究-微生物学专业论文.docxVIP

摘要金地灵芝液态发酵产灵芝多糖条件优化及其发酵 摘要 金地灵芝液态发酵产灵芝多糖条件优化及其发酵 产物功能的研究 微生物学专业 研究生张璐指导教师王一丁教授 摘要 灵芝是我国具有悠久历史的名贵中药，是一种药食两用大型真菌。其 中含有多种生物活性成分，以灵芝多糖为代表，能够治疗高血压、冠心病、肝炎、 哮喘等疾病，在医疗、保健、工业生产中都有极大意义与价值。磷脂酶D是一类 具有水解和转磷脂活性的磷脂酰胆碱酶，存在于动植物及微生物体内，主要被应 用于磷脂改性及稀有磷脂制备，是一种具极大应用价值的酶。利用微生物液态发 酵生产磷脂酶D，与从动植物体内分离磷脂酶D相比，具有生长周期短、易分离 提取、酶活高等优势。 本试验选择引自日本的金地灵芝，介于四川地理环境及气候条件与日本的差异 性，故需对其培养条件进行重新探究。 试验以金地灵芝为试材，以发酵液中灵芝多糖含量为优化指标，运用单因素及 响应面分析法，对液态发酵的培养基及培养条件进行优化；在最优条件下，采用 水提醇沉提取称干重，探究发酵过程中灵芝多糖含量随时间的变化，通过铁氰化 钾还原试验和DPPH自由基清除试验探究发酵液抗氧化活性随时间的变化，分析 发酵液抗氧化活性与发酵液中灵芝多糖含量的关系；采用微量肉汤稀释法，探究 灵芝多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌、白色念珠菌的抑 菌效果：利用发酵液催化卵磷脂与丝氨酸反应，通过TLC、HPLC双重定性检测 反应产物中磷脂酰丝氨酸含量，探究金地灵芝产具转磷脂活性的磷脂酶D的能力。 研究结果如下： 1)结合多糖含量及成本考虑，最优培养基配方为：3．98％玉米粉、0．68％蛋 白胨、O．21％MgS04·7H20、0．05％K2HP04、0．05％KH2P04、0．001％维生素Bl， 优化后多糖含量为1．917 g／100mL，比初始培养基时提高了50．8％；最佳培养条件 万方数据 四川师范大学硕士学位论文为：温度27。C、pH=6、转速150 四川师范大学硕士学位论文 为：温度27。C、pH=6、转速150 rpm、接种量10％、发酵时间5 d，优化后多糖含 量为2．857 g／100mL，比初始条件下提高了49．5％。 2)在连续发酵过程中，发酵5 d时灵芝多糖含量达到最大，为2．852 g／100mL； 7 d时发酵液还原力达最强，吸光值为0．520； 8 d时发酵液DPPH清除率达最高， 80．7％；发酵液抗氧化活性与灵芝多糖含量正相关性极显著。 3)灵芝多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌、白色念珠 菌的抑菌率均可达到100％，其MIC值分别为80 mg／mL、120 mg／mL、60 mg／mL、 100 mg／mL、140 mg／mL。 4)经TLC、HPLC双重定性检测，结果显示反应产物中含有一定量的磷脂酰 丝氨酸，表明金地灵芝具有产磷脂酶D的能力。 上述研究表明，金地灵芝生长周期短，多糖产率高，其发酵产物抗氧化活性强、 抑菌效果好，且发酵产物中所含的磷脂酶D是目前国内鲜有报道的真菌源磷脂酶 D，基于灵芝的药食两用性，此磷脂酶D在医疗保健品生产工业中有更高安全性。 综上，金地灵芝在工业发酵、医疗保健品生产方面具有极高应用价值。 关键词：金地灵芝 液态发酵条件优化灵芝多糖磷脂酶D II 万方数据 摘要Optimizing 摘要 Optimizing Liquid Fermentation Conditions of Ganoderma lucidum Polysaccharides and analyzing functions of the fermentation products Major：Microbiology Postgraduate：Zhang lu Supervisor：Professor Wang Yiding Abstract Ganoderma lucidum IS a valuable traditional Chinese medicine with a long history,which is a medicinal and edible macrofungi．It contains a variety of biologically active ingredients，which polysaccharides represented．Polysaccharides have significant value in medical，health，industrial production．Phospholipase D is a class of phosphatidylcholine hydrolysis enzyme having hydrolytic act