结核杆菌脂质抗原对人外周血单个核细胞的作用-免疫学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 学位论文独创性声明 本人所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取 得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外， 论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的 同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确说明并表示谢 意。 学位论文作者签名： 日 期： 学位论文使用授权声明 本人完全了解安徽医科大学有关保留、使用学位论文的规定：学 校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电 子版和纸质版，有权允许论文进入学校图书馆被查阅，有权将学位论 文的内容编入有关数据库进行检索，有权将学位论文的标题和摘要汇 编出版。愿意将本人的学位论文提交《中国博士学位论文全文数据 库》、《中国优秀硕士学位论文全文数据库》和《中国学位论文全文数 据库》中全文发表，并可以以电子、网络及其他数字媒体形式公开出 版，并同意编入 CNKI《中国知识资源总库》，在《中国博硕士学位论 文评价数据库》中使用和在互联网上传播。保密的学位论文在解密后 适用本规定。 学位论文作者签名： 导师签名： 目 录 中英文缩略词对照表..........……………………………………………….1 中文摘要..........…………………………………………………………….4 英文摘要..........…………………………………………………………….6 1 前言.......………………………………………………………………….8 2 材料与方法.......………………………………………………………….9 2.1 实验材料...……………………………………………………………9 2.1.1 结核分枝杆菌抗原及其配制......…………………………………9 2.1.2 实验标本的来源.............………………………………………10 2.1.3 主要的试剂.....……………………………………………………9 2.1.4 主要仪器和设备...………………………………………………10 2.1.5 主要的试剂配制...………………………………………………12 2.2 实验方法..…………………………………………………………14 2.2.1 人 AB 型血清分离.......…………………………………………14 2.2.2 人外周血（全血）PBMC 分离.………………………………14 2.2.3 人外周血白细胞浓缩液中 PBMC 分离...………………………14 2.2.4 PBMC 的冻存与复苏 ..…………………………………………15 2.2.5 CFSE 和 PI 染色方法 .......………………………………………15 2.2.6 两种血清对结核杆菌抗原培养的比较..........................................15 2.2.7 单核细胞的分离和诱导培养..........………………………………16 2.2.8 粘附细胞的培养前后检测以及 ELISPOT 检测 IL-12 的分泌..…16 2.2.9 ELISA 检测培养中的Ｔ淋巴细胞 TNF-a 含量…………………16 2.2.10 培养后细胞增殖情况及其增殖亚群检测............………………17 2.2.11 培养后细胞的细胞因子分泌情况的检测.........…………………17 2.3 统计学分析....………………………………………………………18 3 结果......…………………………………………………………………18 3.1 两种血清对结核杆菌抗原刺激人外周血细胞增殖的比较....……18 3.2 粘附细胞分离和诱导成功的流式细胞仪结果.................…………21 3.3 imDCs 被多种抗原刺激后流失细胞仪检测成熟度 24 3.4 多种抗原刺激 imDCs 后 ELISPOT 检测结果………………………25 3.5 PBMC 培养中的 ELISA 检测结果.................……………………25 3.6 抗原刺激扩增培养后 T 细胞亚群增值情况...................…………. 26 3.7 抗原刺激扩增培养后 T 细胞分泌 IFN-γ，IL-4，TNF-α 的检测 29 讨论……………….………………………………………………………32 结论......…………………………………………………………………34 参考文献…………………………………………………………………35 安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 附录………………………………………………………………………37 致谢………………………………………………………………