课件：Y遗传性疾病基因治疗的进展.ppt

迄今为止已有近几十种遗传病被列为基因治疗的主要对象，如ADA缺乏症、PNP免疫缺乏症、囊性纤维瘤(CF) 、血友病、血红蛋白病等，其中ADA基因缺乏所致的SEID病、CFIR基因缺乏所致的CF疾病、LDLR基因缺乏所致的家族性高胆固醇血症、凝血因子Ⅸ缺乏所致的血友病B、葡萄糖脑苷脂酶基因(GO)缺乏所致的GD疾病等疾病研究已经进入了临床试验阶段，取得了不同程度的成功 基因治疗的步骤 包括目的基因的克隆、目的基因的转移、目的基因的表达、靶细胞的选择和安全性问题等。 靶细胞的选择根据所治疗的遗传病而定，大体可分为二类，即体细胞和生殖细胞体细胞基因治疗有在体转移和活体直接转移两种选径，目前开展的基因治疗均用体细胞作为靶细胞。遗传病中常用于基因治疗的靶细胞有骨髓造血干细胞、皮肤成纤维细胞、成肌细胞和肝细胞等。生殖细胞基因治疗因涉及敏感的伦理学问题，目前禁止仍人体试验。 目前常用的基因治疗常有 以下几种方法： 转基因治疗 是将正常的基因导入具有缺陷基因的细胞内，并整合到核DNA分子中，再表达相应的遗传信息，使原有的缺陷得到纠正，即传统的目前主要开展的基因治疗。这种方法在理论上可以纠正遗传性疾病，正在进行大量的动物实验，并越来越多地开展人体实验治疗。 基因修复 原位修复是最理想的选择，但目前尚很难做到，因为要在人类基因组的某个特意部位上进行重组是一个非常复杂的过程。即使在不太复杂的模式生物中进行基因定位重组也不容易实现。 基因开放 开放类似功能的基因，以超过或代替异常基因的表达。比如，通过去甲基化使已关闭的γ珠蛋白基因重新开放，合成HbF，以代替HbA用于治疗?-地中海贫血症。 基因抑制 导入外源基因以抑制原有的基因， 目的在于阻断有害基因的表达。如向肿瘤细胞内导入P53等肿瘤抑制基因以抑制癌基因的异常表达。 基因封闭 反义RNA能封闭mRNA，抑制基因的表达。 免疫基因 将免疫因子（如肿瘤坏死因子、干扰素等）基因导入肿瘤浸润淋巴细胞(TIL), 用于提高细胞的免疫功能，加强TIL细胞杀伤肿瘤细胞的能力。 基因导入方法 把外源基因安全有效地转移到靶细胞中，是实现转基因治疗的第一个关键步骤。常用方法有： 注射法 电穿孔法 微粒子轰击法 化学法 载体介导转移法 同源重组法 注射法 注射法是将DNA或DNA-载体直接注射到肌肉及其他器官，使邻近的细胞摄入DNA并进行基因表达。 如通过肌肉注射将腺病毒运载的目的基因转移到骨骼肌细胞上治疗犬模型B型血友病获得满意效果。 电穿孔法 电穿孔法(electroporation) 将靶细胞置于高压脉冲电场中，通过电击使细胞产生可逆性的穿孔，周围基质中的DNA可渗进细胞。有用此法治疗犬和鼠模型血友病B型的报道。 化学法 化学法是应用磷酸钙沉淀法改变细胞膜的通透性，以加强细胞从培养液中摄取外源DNA。但此法转移效率低，其成功率约在1／ 100 ～1／1000。 载体介导转移法 病毒介导转移法 质粒介导转移法 脂质体介导转移法 聚乙烯亚胺介导转移法 病毒介导转移法 病毒介导转移法(viral mediated gene transfer)是通过转换方式完成基因转移，即以病毒为载体，将外源目的基因通过基因重组技术，组装于病毒上，让这种重组病毒去感染受体宿主细胞，这种病毒称为病毒运载体(viral vector)，通常使用的病毒运载体有腺病毒载体、慢病毒载体、腺相关病毒载体、逆转录病毒载体、痘苗病毒载体等。 以腺病毒为载体研究进行的囊性纤维变(cystic fibrosis，CF)转基因治疗在体外培养细胞中获得了成功，即转入的正常基因纠正了CF的缺陷。 而如何将基因导入这些细胞并回到其功能位置，则是一件十分棘手的事，目前有报道提示喷雾法导入病毒运载体避免了直接滴注法的许多不利因素，也优于一般雾化吸入。 其他如腺相关病毒介导转移法治疗鼠Ⅶ型粘多糖增多症模型，鼠A型血友病模型，鼠脑白质营养障碍模型等。 用逆转录病毒载体治疗鼠球状细胞白质营养障碍，都使其临床症状得到改善。 质粒介导转移法 质粒介导转移法是将含有目的基因的重组质粒和某些细胞表面受体能识别的特异性多肽(配体)形成复合物，可通过细胞内吞途径达到转移基因的目的。 例如在体外通过质粒转移凝固因子Ⅷ基因于皮肤成纤维细胞中再植入体内治疗重度A型血友病。 脂质体介导转移法