实验四：血液样的处理及组织样品的制备.pptVIP

实验五：血液生化样品处理 及组织样品的制备 目的要求 了解血液生化样品制备的原理；掌握血液生化样品制备的方法。 掌握离心机使用方法和注意事项 一、血液生化样品制备 采血　　测定用的血液，多由静脉采集。一般在饲喂前空腹采取，因此时血液中化学成分含量比较稳定。采血时所用的针头、注射器、盛血容器要清洁干燥；接血时应让血液沿着容器壁慢慢注入，以防溶血和产生泡沫。 血清的制备 血清：全血不加抗凝剂自然凝固后析出的淡黄色液体。 血清的制备：由静脉采集的血液，注入清洁干燥的试管或离心管中。将试管放成斜面，让其自然凝固，一般经3h血块自然收缩而析出血清；也可将血样放入37℃恒温箱内，促使血块收缩，能较快的析出血清。为了缩短时间，也可用离心机分离(未凝或凝固后均可离心)，分离出的血清，用滴管移人另一试管中供测定用，如不及时使用，应贮于冰箱中。分离出的血清不应溶血。 全血及血浆的制备 全血：采血前加入抗凝剂，包括了血浆和 血纤蛋白。 血浆：全血离心后除去血纤蛋白的液体。 抗凝剂：凡是能抑制血液凝固反应的化合 物称为抗凝剂。 常用抗凝剂的使用方法 1、草酸钾(钠)。 其优点是溶解度大，与血液混合后，迅速与血中钙离子结合，形成不溶的草酸钙，使血液不再凝固。 配制方法：通常先配成10％草酸钾或草酸钠溶液，然后吸取此液0.1ml于试管中，转动试管，使其铺散在试管壁上，置80℃干燥箱内烘干，管壁呈白色粉末状，加塞备用。每管含草酸钾或草酸钠10mg，可抗凝血液5ml。 应用范围：适用于非蛋白氮、血糖等多种测定项目，但不适用于钾、钠和钙的测定；另外草酸盐能抑制乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶和淀粉酶，故使用时给予注意。 草酸钾一氟化钠混合剂。 血液内某些化学成分(如血糖)离开机体后仍易被酶作用而影响测定结果。如用混合剂可抑制酶的作用(氟化钠有抑制糖酵解作用)，因而能防止血糖等化学物质的分解。 配制方法：称取草酸钾6g，氟化钠3g，加蒸馏水至lOOml，分装在试管内，每管0.25ml。80℃烘干后加塞备用。每管含混合剂22.5mg，可抗凝血液5ml。 应用范围：最适用于血糖的测定，而不适用于脲酶法的尿素氮测定(因氟化钠能抑制脲酶活性)。 肝素 是一种较好的抗凝剂，因它对血中有机成分和无机成分的测定均无影响，其主要作用是抑制凝血酶原转变为凝血酶，使纤维蛋白原不能转化为纤维蛋白而凝血。 配制方法：常将肝素配成lmg／ml的水溶液，每管装0．1ml，再横放蒸干(不宜超过50℃)备用。每管可抗凝血液5～lOml。 市售肝素大多数为钠盐，可按10mg／ml配制成水溶液。每管装0.1ml，按上法烘干，可使5～lOml血液不凝固。 应用范围：适用于血液有机物的测定；不适用于凝血酶原的测定。 乙二胺四乙酸二钠盐(简称EDTANa2) EDTANa2对血液中钙离子有很大的亲和力，能使钙离子络合而使血液不凝固。 配制方法：常配成40mg／mlEDTANa2水溶液，每管分装0.1ml，在80℃干燥箱内烘干备用。每管可抗凝血液5ml。 应用范围：适用于多种生化分析，但不适用于血浆中含氮物质、钙及钠的测定。 血浆的制备 血浆的制备由静脉采集的血液，放人装有抗凝剂的试管或离心管中，轻轻摇动，使血液与抗凝剂充分混合，以防小血块的形成。抗凝血可静置或离心沉淀分离(2000r／min,10min)，以使血细胞下沉，上清液即为血浆。血浆与血清成分基本相似，只是血清不含纤维蛋白原。 无蛋白血滤液的制备 多生化分析要避免蛋白质干扰，常常先将其中蛋白质除去；分析血液中许多成分时，也常常需要除去蛋白质，制成无蛋白质的血滤液。制备无蛋白血滤液的方法很多，可根据不同的需要加以选择。现将生化常用的无蛋白血滤液制备方法介绍如下： 钨酸法 原理：血液中的蛋白质在pH小于其等电点时，可用钨酸来沉淀。钨酸钠与硫酸混合产生钨酸和硫酸钠，游离的钨酸被，蛋白质吸附，形成不溶性的钨酸蛋白而沉淀，经过滤或离心，除去沉淀即得无蛋白的血滤液。 试剂： ①10%钨酸钠溶液；②0.333mol／L硫酸溶液。 仪器与器材：锥形瓶、吸管、奥氏吸管、滤纸、漏斗或离心管及离心机。 方法与步骤： ①取50ml锥形瓶1只，加入蒸馏水7份；②用奥氏吸管吸取抗凝血l份，擦去管壁外血液，将吸管插人锥形瓶中水的底部，缓慢地放出血液。放完血液后，将吸管提高吸取上清液再吹人，反复洗管3次。充分混合，使红细胞完全溶解； ③加入0.333mol／L硫酸溶液1份，随加随摇，充分混匀。此时血液由鲜红变成棕色，静置5～10min，使其酸化完全；④加入10％钨酸钠溶液1份，边加边摇，血液由透明变成凝块状。当振摇到不再产生泡沫为止；⑤放置数分钟后用定量滤纸过滤或离心除去沉