镜鲤肌肉品质性状SSR分析与HUFA合成关键酶基因克隆及表达-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

镜鲤肌肉品质性状SSR分析与HUFA合成关键酶基因克隆及表达-生物化学与分子生物学专业论文.docx

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项目资助 本研究由国家自然科学基金、中央级公益性 科研院所基本科研业务专项资金(HSY201303)和农业部引进 (948)项(2011-G12)共同资助。 摘要 摘要 摘要 为了深入探讨鲤肌肉品质性状改良和鲤的高不饱和脂肪酸(HUFA)合成代谢调控机制, 本研究分析微卫星标记与镜鲤肌肉脂肪和蛋白质含量之间的相关性,找到了与这两种性状 相关的优势基因型。使用RT-PCR和RACE方法克隆镜鲤肝脏中高不饱和脂肪酸合成关键酶 基因Δ6脂肪酸脱氢酶(Δ6FAD)基因和脂肪酸延长酶5(ELOVL5)基因,并对其组织表达特性 进行了研究,这将有助于探明鲤HUFA合成代谢调控机制,研发提高鲤HUFA合成能力的方 法,促进鲤鱼配合饲料的研究和应用及其养殖业的发展。 主要结果如下: (1)利用233个微卫星标记检测镜鲤(Cyprinus carpio)一个家系的107尾个体的基因型, 采用GLM方法对肌肉脂肪含量和蛋白质含量进行单标记回归分析。Permutation检验结果显 示:有17个标记分别与肌肉脂肪和蛋白质含量具有显著相关性(P0.05),其中,有4个标记 (HLJ030、HLJ2560、HLJ3633和HLJ3554)与肌肉蛋白质含量呈极显著相关(P0.01),表明 这些标记与性状间可能存在连锁关系。 (2)获得Δ6脂肪酸脱氢酶基因全长序列(KJ576791),其cDNA全长为1 471bp,编码444 个氨基酸。氨基酸序列与已克隆的鱼类Δ6或Δ5脂肪酸脱氢酶具有65%-91%相似性,且具有 典型的脂肪酸去饱和酶的结构特性具有典型的脂肪酸脱氢酶基因的特征结构。 (3)获得脂肪酸延长酶 5 基因全长序列(KF924199),其 cDNA 全长 1 121bp,编码 291 个氨基酸。氨基酸序列与已克隆的鱼类脂肪酸延长酶 5 基因的氨基酸序列具有 74%-93%同 源性,且具有典型的脂肪酸延长酶的结构特性。 (4)通过实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测两个基因在镜鲤不同组织中的表达量,发 现镜鲤 Δ6 脂肪酸脱氢酶(Δ6FAD)基因在肝脏中表达最高,其次是背肌、腹肌和脑,在心、 肾、肠等组织中表达水平很低或难以检测到。镜鲤脂肪酸延长酶 5(ELOVL5)基因在镜鲤肝 脏中表达量最高,其次为脑,在背部肌肉中表达最低。 关键词:镜鲤;微卫星;肌肉品质;HUFA 合成关键酶基因;特征分析 Ⅰ Ab Abstract Abstract To evaluate the quality traits selecting of Common carp (Cyprinus carpio L.) and the clarification of HUFA biosynthetic mechanism, we analyze the Correlation between microsatellite markers with fat content and protein content of muscle. The genotypes of these correlative loci captured were determined .To study the regulatory role ofΔ6 FAD and ELOVL5 in the biosynthesis of HUFA, the full-length ELOVL5 cDNA of mirror carp was cloned by using reverse transcript PCR (RT-PCR) and rapid amplification of cDNA ends (RACE).The enzyme gene expression in different tissues of Mirror carp was determined. It will be helpful for clarify the HUFA biosynthetic mechanism in Common carp, for the development of method in enhancing such ability. The latter will accelerate the development and application of formulated feeds, as well as the development of aquiculture. The results were shown as follows: A total of 233 microsatellite markers were used to analyze the gen

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