分光光度计的使用课件.pptVIP

* Transmittance , absorbance , 主要内容 １、分光光度法的概念 ２、分光光度计的结构与原理 ３、分光光度计的使用 ４、实验操作（CuSO4溶液标准曲线的绘制） 分光光度法的概念 分光光度法：是利用物质特有的吸收光谱，进行物质鉴定及测定其含量的一种分析技术。也称为吸收光谱法。是光谱分析技术中最常见的一种，应用最多的是紫外及可见分光光度法。 特点：灵敏、精确、快速和简便。 应用：生物化学微量物质定量分析测定研究中广泛使用的方法之一，常用于糖，蛋白质，核酸，酶等的快速定量检测。 光谱范围：200～1000nm 。 分光光度法的概念 红外分光光度计:大于760 nm的红外光区 可见光分光光度计:400～760 nm的可见光区 紫外分光光度计: 200～400 nm的紫外光区 分光光度计的分类 722E可见分光光度计 722E可见分光光度计 分光光度计的基本结构 光源 单色 光器 吸收池 检测 系统 钨丝灯 氢灯 氘灯 棱镜 衍射光栅 玻璃比色杯 石英比色杯 硒光电池 光电管 光电倍增管 当一束单色光透过溶液时 部分被吸收 部分被反射 部分被透过 Ir Ia I 入射光 I0 出射光 I 比色皿 吸收杯 反射光 Ir Ia 吸收光 分光光度计基本原理 Ｉ/ I0表示光线透过溶液的程度,称为透光度,用T表示；－IgT表示溶液对光线的吸收程度，用吸光度（A）表示。即 I0 C I A＝－IgT ＝－Ig I I0 ←L → Lambert-Beer定律（光吸收定律） Lambert定律：A＝K1L Beer定律：A＝K2C Lambert-Beer定律：当一束单色光垂直通过一均匀的溶液时，溶液的吸光度A，与溶液的浓度C及溶液的厚度L成正比。即 A＝KCL 其中：A－吸光度 K－为消光常数，表示物质对光线吸收的能力，受物质种类和光线波长的影响 C－溶液的浓度 L－溶液的厚度 Lambert-Beer定律的应用 1、利用标准管计算测定物的含量 用一已知浓度标准溶液和一个未知浓度的待测溶液同样处理显色，测定吸光度，根据Lambert-Beer定律得： A1=K1C1L1 A2=K2C2L2 因为 K1=K2 L1=L2 所以 C2= A2 A1 ×C1 * Transmittance , absorbance ,