cpcB与CT融合蛋白表达质粒在大肠杆菌中的表达和纯化.pdfVIP

高技术通讯 年 月 第 卷 第 期 2005 5 l5 5 cpcB 与CT 融合蛋白表达质粒在大肠杆菌中的表达和纯化! ! 王玉梅 张学成 周一江 隋正红 茅云翔 （中国海洋大学海洋生命学院 青岛266003） 摘 要 将人和鲑鱼嵌合型降钙素基因与藻蓝蛋白的 亚基基因相连，插入融合表达载 # 体pGEX-4T-3 中，转化大肠杆菌BL2l。融合蛋白cpcB-CT 基因在IPTG 诱导下获得高效表 达。超声破碎后，经SDS分析，在48kD 处有新增条，灰度扫描测定，过表达蛋白量 占 ， 为包涵体。包涵体经变性、复性，过 亲和吸附 50 % ~ 60 % 85 % Glutathion-Sepharose-4B 柱，获含有GST 的融合蛋白，该蛋白经凝血酶消化和截留分离，获得纯化的融合蛋白cpcB- 。 分析表明，产物具有与合成人降钙素相似的抗原决定簇部分； CT Western blotting ELISA- 受体法和大鼠降血钙试验表明，其具有降血钙作用。提示该融合蛋白可能具有良好的应 用前景。 关键词 降钙素，藻蓝蛋白 亚基，融合蛋白，降血钙活性 # ［］ 4 表达 。本实验室曾以人和鲑鱼降钙素为先导物， 0 引 言 利用计算机辅助软件设计合成了具有低抗原性和高 生物活性的嵌合降钙素基因，构建了重组表达质粒 降钙素（ ， ）是由 个氨基酸组成的 calcitonin CT 32 pGEX-cCT ，并在大肠杆菌中得到高效可溶性表达， 多肽，它是由哺乳动物的甲状腺滤泡旁细胞（ 细 C 但在纯化目的蛋白过程中有降解现象。本研究为增 胞）或鱼鸟等其它脊椎动物的后腮体分泌的一种肽 加目的蛋白的稳定性，提高CT 生物半衰期，将嵌合 类激素，在骨和肾都有其相应的受体，在体内的主要 型降钙素基因与藻蓝蛋白的 亚基基因相连，构建 # 作用是通过抑制破骨细胞活性，减少骨质吸收，促进 成功了融合蛋白cpcB-CT 基因，导入 GST 融合表达 ［］ 钙在骨中的沉积，从而降低血钙 l 。临床上降钙素 载体，结果表明产物具有降血钙活性。 广泛用于治疗骨质疏松、 ’疾病、高钙血症、肿 Paget s ［］ 2 瘤性疾病、一些消化系统疾病以及镇痛 。不同来 l 材料与方法 源的降钙素对人都显示生物活性，其中鲑鱼降钙素 （ ）活性很高，达到 ，半衰期 sCT