微小RNA1245p对宫颈癌细胞增殖和肿瘤恶化程度的影响-江苏大学.PDFVIP

第２７卷第１期 江 苏 大 学 学 报（医学 版） Ｖｏｌ．２７ Ｎｏ．１ 　 ２０１７年１月 　 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＭｅｄｉｃｉｎｅＥｄｉｔｉｏｎ） Ｊａｎ．２０１７ 　 　 　 　 　 　 微小 ＲＮＡ１２４５ｐ对宫颈癌细胞增殖和肿瘤恶化程度的影响 徐静云，丁祥亚，卢春 （南京医科大学病原生物学系，江苏 南京２１１１６６） ［摘要］　目的：建立稳定表达微小ＲＮＡ１２４５ｐ（ｍｉＲ１２４５ｐ）的宫颈癌细胞系，探讨ｍｉＲ１２４５ｐ对宫颈癌细胞增殖和 肿瘤恶化程度的影响。方法：采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增 ｍｉＲ１２４５ｐ的前体序列，将其克隆至ｍｐＣＤＨＣＭＶ ＭＣＳＥＦ１ｔＲＦＰ（简称为ｍｐＣＤＨ）载体中，构建重组质粒ｍｐＣＤＨｍｉＲ１２４５ｐ。通过慢病毒包装系统将目的质粒ｍｐＣ ＤＨｍｉＲ１２４５ｐ或空载体ｍｐＣＤＨ与包装质粒 ｐｓＰＡＸ２以及包膜质粒 ｐＭＤ２．Ｇ共转染入人胚肾上皮细胞（２９３Ｔ细 胞），收集病毒液分别感染宫颈癌ＨｅＬａ和ＳｉＨａ细胞系。观察４８ｈ后红色荧光蛋白（ＲＦＰ）阳性细胞的比例。进一步 采用实时荧光定量ＰＣＲ（ｑＲＴＰＣＲ）检测感染后宫颈癌细胞中ｍｉＲ１２４５ｐ的表达水平，运用虫荧光素酶报告实验验证 ｍｉＲ１２４５ｐ的活性。通过平板克隆实验和软琼脂集落形成实验观察ｍｉＲ１２４５ｐ对宫颈癌细胞增殖能力和肿瘤恶化 程度的影响。结果：成功构建重组质粒ｍｐＣＤＨｍｉＲ１２４５ｐ。重组ｍｉＲ１２４５ｐ慢病毒感染宫颈癌细胞系后细胞状态 良好，且荧光率高达９０％。建立了稳定表达ｍｉＲ１２４５ｐ的宫颈癌细胞系。过表达ｍｉＲ１２４５ｐ后，宫颈癌细胞的增殖 能力以及软琼脂集落形成能力明显减弱。结论：ｍｉＲ１２４５ｐ能够抑制宫颈癌细胞的增殖和肿瘤恶化程度。 ［关键词］　ｍｉＲ１２４５ｐ；宫颈癌；慢病毒；增殖；集落形成 ［中图分类号］　Ｒ７３７．３３　　［文献标志码］　Ａ　　［文章编号］　１６７１－７７８３（２０１７）０１－００５３－０５ ＤＯＩ：１０．１３３１２／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１７７８３．ｙ１６０２７５ ［引用格式］徐静云，丁祥亚，卢春．微小ＲＮＡ１２４５ｐ对宫颈癌细胞增殖和肿瘤恶化程度的影响［Ｊ］．江苏大学学报 （医学版），２０１７，２７（１）：５３－５７． ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｍｉＲ１２４５ｐｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｅｒｖｉｃａｌｃａｎｃｅｒ ＸＵＪｉｎｇｙｕｎ，ＤＩＮＧＸｉａｎｇｙａ，ＬＵＣｈｕｎ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ＮａｎｊｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＮａｎｊｉｎｇＪｉａｎｇｓｕ２１１１６６，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｃｅｒｖｉｃａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅｓｓｔａｂｌｙｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｍｉＲ１２４５ｐａｎｄｔｏｉｎｖｅｓ ｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｍｉＲ１２４５ｐｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｃｅｒｖｉｃａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ： ＴｈｅｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｍｉＲ１２４５ｐｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＰＣＲ）ａｎｄｔｈｅｎｃｌｏｎｅｄ ｉｎｔｏｔｈｅｍｐＣＤＨＣＭＶＭＣＳＥＦ１ｔＲＦＰ（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄａｓｍｐＣＤＨ）．Ｔｈｅ