盐酸药根碱抗异丙肾上腺素诱导的心肌H9c2细胞肥大作用研究.PDF

２０ 17 年6 月第34 卷第6 期 天 津 中 医 药 Jun. ２０ 17熏Ｖｏｌ ．34 Ｎｏ ．6 Ｔｉａｎｊｉｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 4 11 DOI ：10.11656/j .issn.1672-1519.20 17.06.16 ·中药研究 · 盐酸药根碱抗异丙肾上腺素诱导的 心肌H9c2 细胞肥大作用研究* 1 2 2 2 牛子长 ，高云航 ，王兴业 ，毛浩萍 （1．天津中医药大学第一附属医院，天津 300 193 ；2. 天津中医药大学中医药研究院，天津 300 193 ） 摘要 ：[ 目的] 研究盐酸药根碱对异丙肾上腺素诱导的H9c2 心肌细胞肥大的影响。[方法] 采用体外培养的心肌 H9c2 细胞，通过检测细胞总蛋白的方法评价细胞肥大程度，采用实时聚合酶链反应（PCR ）的方法检测盐酸药根碱对 异丙肾上腺素诱导的心钠肽（ANP ）和脑钠肽（BNP ）mRNA 水平上升的影响。使用钙-4 试剂盒检测细胞内钙离子浓 度。细胞转染β1 肾上腺素受体，考察盐酸药根碱与β1 肾上腺素受体竞争性结合能力。采用Western blot 方法考察盐 酸药根碱对异丙肾上腺素（ISO ）诱导的ERK 通路磷酸化的影响。[结果] 盐酸药根碱显著抑制异丙肾上腺素诱导的 H9c2 细胞肥大。盐酸药根碱显著抑制异丙肾上腺素诱导的H9c2 细胞中ANP 及BNP mRNA 水平上升；ISO 及盐酸药 根碱与β1 肾上腺素受体均具有一定的结合能力。盐酸药根碱抑制ISO 诱导的ERK 信号通路激活。[结论] 盐酸药根 碱能通过与β1 肾上腺素受体结合发挥抑制ERK 信号通路激活而抗心肌肥大作用。 关键词 ：盐酸药根碱；心肌肥大；异丙肾上腺素；钙离子浓度；心房钠肽；脑钠肽；β1 肾上腺素受体 中图分类号 ：R542.2 文献标志码 ：A 文章编号 ：1672-1519（2017）06-04 11-04 心肌肥大是心肌细胞受激素水平变化或理化 具有抗心肌细胞肥大作用及其相关机制。 [1] 刺激时作出的一种基本应答 ，是一种代偿过程，它 1 材料与方法 能维持一定心输出量而保证正常心脏功能。然而高 1.1 试剂 盐酸药根碱购自天津食品药品检验所。 血压、冠心病等长时间应激导致的持续性心肌肥大 异丙肾上腺素（ISO ）（美国Sigma 公司）。DMEM 培 又是导致心血管疾病发病率和病死病残率显著升 养液、胎牛血清、0.25%胰酶和Lipofectamine 2000 高的独立危险因素。心肌肥大极易导致心肌缺血、 （美国Invitrogen 公司）。75 U/mL 青霉素和75 μg/mg 心律失常（包括猝死）的发生，最终可发展为心力衰 链霉素（美国Hyclone 公司）。BCA 蛋白检测试剂盒 [2-3] 竭 。研究显示长期高水平的β-AR 刺激是诱发心 （中国碧云天生物技术有限公司）。β1 受体质粒和 [4-5] 肌细胞肥大的重要因素 。因此，从 β-AR 角度阐 Tag-lite 试剂（法国Cisbio 公司）。钙-4 试剂盒（美国 明药物对心肌细胞肥大的影响对开发有效药物和 Molecular Devices 公司）。 降低病死病残率有重大意义。 1.2 H9c2 细胞 H9c2 细胞（美国ATCC 公司）。 黄连为毛莨科植物黄连的干燥根茎，味苦，寒， 2