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4．1．3．2平菇PoChil、乃船的克隆……………………………………………．35
4．1．3．3克隆载体T-gpt的构建…………………………………………………．36
4．1．3．4过量表达载体pBHg．gpt的构建………………………………………．38
4。1．4平菇PoChil反义表达载体的构建……………………………………………38
4．1．4．1平菇反PoChil的克隆…………………………………………………．38
4．1．4．2克隆载体T-gfpt的构建…………………………………………………39
4．1．4．3反义表达载体pBHg．gfpt的构建………………………………………39
4．2结果与分析……………………………………………………………………………．39
4．2．1平菇PoChil过量表达载体的构建……………………………………………39
4．2．2平菇PoChil反义表达载体的构建……………………………………………44
4．2．2．1反义PoChil的克隆……………………………………………………．44
4．2．2．2PoChil反义表达载体的构建……………………………………………46
4．3本章小结………………………………………………………………………………．49
第五章转几丁质酶基因平菇菌株的筛选与分析……………………………………………．．50
5．1材料与方法……………………………………………………………………………．50
5．1．1材料………………………………………………………………………………………………………．50
5．1．1．1菌种和质粒………………………………………………………………50
5．1．1．2培养基配方………………………………………………………………50
5．1．1．3主要试剂…………………………………………………………………50
5．1．1．4仪器………………………………………………………………………50
5．1．2转化农杆菌EHAl05……………………………………………………………50
5．1．2．1农杆菌感受态细胞的制备………………………………………………51
5。1．2．2
5．1．3平菇潮霉素筛选浓度的确定…………………………………………………．．51
5．1．4农杆菌介导转化平菇…………………………………………………………一51
5．1．5筛选与PCR分析………………………………………………………………．51
5．1．5．1设计引物…………………………………………………………………51
1
5．1．5．2潮霉素抗性筛选与PCR分析…………………………………………．．5
5．1．6转化子和出发菌株培养………………………………………………………．．53
5．2结果与分析……………………………………………………………………………．53
IV
5．2．1转化农杆菌检测………………………………………………………………．．53
5．2．2潮霉素筛选浓度的确定………………………………………………………一54
5．2．3转几丁质酶基因平菇菌株的筛选及鉴定………………………………………54
5．2．4转化子和出发菌株菌丝生长情况……………………………………………．．58
5．3小结……………………………………………………………………………………．59
第六章讨论……………………………………………………………………………………60
1
参考文献……………………………………………………………………………………．．6
英文摘要……………………………………………
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