内参法在线粒体DNA纯度鉴定中的应用-麦类作物学报.PDF

麦类作物学报 　2009 ,29 (6) : J ournal of Triticeae Crop s 内参法在线粒体 D NA 纯度鉴定中的应用 袁正杰 ,张改生 ,孙 瑞 ,胡俊敏 ,位明明 ,张龙雨 , 李红霞 ,陈蕊红 ,牛 娜 ,马守才 ( 西北农林科技大学 陕西省作物杂种优势研究与利用重点实验室/ 小麦育种教育部工程研究中心 , 陕西杨凌 7 12 100) ( ) β (β 摘 　要 : 为了确定普通差速离心法提取的小麦线粒体 DNA mtDN A 的纯度 , 以小麦肌动蛋白 亚基 Ac ) ( ) ( ) tin 、1 ,5二磷酸核酮糖羧化酶/ 加氧酶大亚基 RabcL 和细胞色素 C 氧化酶第三亚基 COXIII 基因的片段作为内 ( ) 参标记 ,依靠聚合酶链式反应 PCR 及琼脂糖凝胶电泳技术 ,对提取的 mtDN A 进行了检测 。结果表明 ,普通差速 离心法提取的 mtDN A 中混杂有核 DN A 和叶绿体 DNA (ctDN A) 。对提取的 mtDN A 稀释后再进行内参法检测 , 结果发现 ,当 mtDNA 稀释到 DN A 原液的 300 ～400 倍时 ,混杂其中的核 DNA 已达不到 PCR 反应的敏感度 ,但 mtDN A 、ctDN A 仍能满足作为 PCR 反应体系模板的要求 。此时 ,提取到的 mtDN A 可视为无核 DN A 污染的细胞 质基因组 DN A 。 关键词 : 小麦 ;线粒体 DN A ; 内参法 ;纯度鉴定 ( ) 中图分类号 :S5 12 . 1 ; S3 12 　　　　文献标识码 : A 　　　　文章编号 :1009104 1 2009 Appl ication of Internal Ref erence Method in Identif ication of Mitochondrial D NA Purity Y UAN Zhengj ie , ZHANG Gaisheng , SUN Rui , HU Junmin , WEI Mingming , ZHANG Longyu ,L I Hongxia , CHEN Ruihong , NIU Na , MA Shoucai ( Key L aboratory of Crop Het ero si s of Shaanxi Province , Nort hwest A F U niver sit y , Wheat Breeding Engineering Research Cent er , Mini st ry of Education , Yangling , Shaanxi 7 12 100 , China)