蛋白质组学技术服务.pptx

蛋白质组学技术简介A brief introduction of proteomics technologies;;一、蛋白质组学的背景; 基因组 全部DNA总和 what could happen?;疾病 VS 正常 用于寻找疾病相关的蛋白质标志物，研究疾病发病机制；;;双向电泳（2DE） 第一向：等电聚焦 :以蛋白质的等电点差异进行分离； 第二向：SDS：根据蛋白质分子量大小差异进行分离。 ;A 小鼠脑组织 B 血清 C 动物细胞 D 拟南芥 E 胞外蛋白 F 线粒体;目的：探讨囊藻毒素(MCLR)的毒性作用机制，寻找其毒性作用靶点;荧光差异双向电泳（DIGE） DIGE：用三种荧光染料（Cy2、Cy3、Cy5）标记不同组别的蛋白。其中Cy3和Cy5分别标记两组蛋白，Cy2标记所有组别蛋白的混合物，作为内参使用。在激光扫描仪中用三种不同波长的激光进行扫描，在同一张凝胶中可得到三组蛋白的图谱。 ;Mix;DIGE的优势;A：大鼠脑组织，B：植物根，C：植物花柱，D：大鼠肝脏组织，E：细菌膜蛋白，F：寄生虫;4 types of T.gondii;SILAC—体内同位素标记技术 培养基中添加轻、中、重型同位素的必须氨基酸进行细胞培养，使细胞内蛋白被稳定同位素标记。收获并裂解细胞，提取蛋白，按蛋白量等比例混合，酶切后，经过二维液相色谱分离组分，进入质谱仪进行质谱鉴定。质谱仪可检测到成对出现的肽段信号峰，通过定量软件可以得到蛋白质相对定量信息。;16;;Why SILAC ? 标记效率高，可达100%； 定量准确，降低了由样品制备过程引起的误差； 高通量，可同时进行3组实验，同时鉴定并定量数百至数千种蛋白质； 灵敏度高，检可测测到纳克级水平； 操作方便，在缺乏L-赖氨酸和L-精氨酸的培养基中添加同位素标记的这两种氨基酸，操作方便；;SILAC –LC-MS/MS proteomics analysis;iTRAQ—体外同位素标记技术 蛋白质被酶切后形成多肽，用iTRAQ同位素试剂标记多肽N末端或赖氨酸侧链基团。标记后的肽段经过液相分离，进行一级质谱和二级质谱分析，在二级质谱前，被标记的不同样本中的同一种肽段表现为相同的质荷比和其他理化性质。而在二级质谱中，信号离子表现为不同质荷比(113～119，121)的峰，根据波峰的高度及面积，可以鉴定出蛋白质和分析出同一蛋白质不同处理的定量信息。;21;Why iTRAQ ? 标记效率高，可达97%； 高通量：可同时标记4-8个样品； 高灵敏度：可检测纳克级样品； 应用广：可标记各种动物、植物、微生物、血浆、体液、细胞培养物等样本； 可标记修饰后的氨基酸，可进行蛋白质翻译后修饰的定性、定量研究。;目的：研究SlyA过表达与细菌荚膜多糖合成的关系。;;辉骏生物科技有限公司简介;部分客户发表的文章;Li, Y. et al. Production of biomass and lipid by the microalgae Chlorella protothecoides with heterotrophic-Cu(II) stressed (HCuS) coupling cultivation. Bioresour Technol 148, 283-92 (2013). Li, Y. et al. Production of biomass and lipid by the microalgae Chlorella protothecoides with heterotrophic-Cu(II) stressed (HCuS) coupling cultivation. Bioresour Technol 148, 283-92 (2013). Qiu, N. et al. Proteomic analysis of egg white proteins during the early phase of embryonic development. J Proteomics 75, 1895-905 (2012). Sun, H. et al. Differences in grain ultrastructure, phytochemical and proteomic profiles between the two contrasting grain Cd-accumulation barley genotypes. PLoS One 8, e79158 (2013). Xi, L. et al. Differentially expressed proteins of pathogenic Penicillium mar