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浦东新区5岁以下儿童腹泻病病原谱监测研 【摘要】目的了解上海市浦东新区5岁以下儿 童腹泻病的病原谱构成、病原特征，为制定预防控制措施提 供依据。方法 对2012年2月一2013年1月，浦东新区人 民医院、儿童医学中心两家监测点医院对619例腹泻患儿进 行个案调查，同时采集粪便标本进行肠道致病菌和病毒的检 测。结果 病毒检出率分别为：NV (11.95%)、RV (7.27%)、 EADV (2.91%)、SPV (1.45%)、ASTV (0. 97%)；细菌检出率 分别为：致泻性大肠埃希菌(5.65%)、非伤寒沙门菌(2.42%)、 弯曲菌(0.81%).嗜水气单胞菌(0.65%)、志贺菌(0. 48%). 小肠结肠炎耶尔森菌(0. 32%)；病毒的检出率8月份至来年 的3月份为27. 70%,高于其他月份的18.48%, (=7. 18, P 1对象与方法 1. 1调查对象 自2012年2月一2013年1月，在本区设置浦东新区人 民医院、儿童医学中心为监测点医院。调查的腹泻儿童需满 足：①每日排便3次或3次以上，且大便性状有改变；②年 龄在0?59月龄的儿童。同一患者治愈后间隔7天再次腹泻, 定义为发生另一次腹泻。 1. 2调查内容和方法 监测点医院发现符合监测病例定义的患者时，采集标本 同时填写个案调查表，调查内容主要包括：儿童基本情况， 入院情况（发病、就诊日期，症状、大便常规检测结果）、 标本采集信息。 1. 3采样方法 采集性状改变的粪便5克/5毫升，置于无菌粪便采样杯 （不加任何试剂），用3支无菌棉拭多点采集粪便标本（如 有脓血或黏液应挑取脓血、黏液部分，液体粪便应取絮状物, 使棉拭表面布满粪便），置于试管内，试管内标本放置在 4-8€冰箱中保存不超过24h,采样杯内标本采集后30分钟 内立即将标本放置在-2CTC冰箱中。采集标本的时间需覆盖 全年各月，每家监测点医院每周采集标本5-8例。 标本送至浦东疾控微检科进行肠道致病菌（致泻大肠杆 菌、沙门菌、志贺菌、弯曲菌、小肠结肠炎耶尔森菌、弧菌、 类志贺邻单胞菌、嗜水气单胞菌）、诺如病毒（NV）、轮状病 毒（RV）、肠道腺病毒（EADV）、星状病毒（ASTV）、扎如病 毒（SPV）的检测。 1. 4检测方法和试剂 1. 4. 1病毒检测试剂和方法 1. 4. 1. 1主要试剂：检测试剂均采用商品化核酸扩增荧 光检测试剂盒，其中，NV、EADV试剂盒购自中山大学达安 基因股份有限公司，RV、ASTV和SPV试剂盒购自上海之江生 物科技有限公司，所有试剂均在有效期内使用。 1. 4. 1. 2实验方法：粪便标本处理：取2g左右粪便加 入装有10 ml磷酸缓冲液的15 ml离心管中，拧紧离心管, 用震荡器剧烈震荡，用冷冻离心机离心3000 gX10 min,取 200 P 1上清液用QIAxtractor全自动核酸抽提仪提取核 酸，得到总核酸体积为60 ul,备用。 1. 4. 1. 3.实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time quantitative PCR, RQ-PCR):检测根据商品化的 RV、NV、 ASTV、SPV、EADV实时荧光试剂盒说明书，将提取好的核酸 标本在0PTIC0N2实时荧光定量PCR仪、7500fast实时荧 光定量PCR仪以及7000实时荧光定量PCR仪上进行 RQ-PCR反应。试剂配制及荧光PCR反应条件参见试剂盒说 明书。 1.4.2细菌检测试剂和方法 1.4. 2. 1主要试剂 碱性蛋白豚水增菌液、改良磷酸盐 缓冲液增菌液、麦康凯培养基、TCBS培养基由上海市疾病预 防控制中心腹泻病试剂供应中心提供；沙门菌SBG增菌液、 沙门菌显色平板由科玛嘉科技股份有限公司提供；XLD培养 基、气单胞培养基、CIN培养基干粉试剂由英国OXOID公司 提供。 1.4. 2. 2试验方法 肠道病原细菌检测方法参照中国疾 病预防控制中心腹泻症候群监测技术方案，大肠杆菌、志贺 菌采用直接接种培养基；致泻性弧菌（霍乱弧菌、副溶血性 弧菌）、沙门菌、气单胞菌、类志贺邻单胞菌、小肠结肠炎 耶尔森菌采样增菌后，接种相应的培养基，在适宜的培养温 度下，培养18-24小时后挑取可疑菌落进行进一步的生化鉴 定分析。 1.5资料收集及统计方法 运用Epidata3.0建立数据库，数据进行双录入。用 SPSS 16.0软件进行数据分析，卡方检验对多个标本率进行 比较。 2结果 2. 1基本情况 2012年2月一2013年1月共监测5岁以下腹泻儿童619 例，监测病例年龄最小出生不足一月的婴儿，最大年龄为4 岁。分析不同年龄组病例之间的性别构成，无统计学差异 （=1. 3698, P=0. 8494）,性别分布各组均衡（表1）。 表15岁以下腹泻儿童年龄性别构成 2