法医DNA分型、亲子鉴定和生物性检材的个人识别.pptVIP

第十七章 法医DNA分型 王伯平 武汉大学医学院法医教研室 E-mail address: wangboping2006@163.com 一、遗传标记 遗传多态性（genetic polymorphism)：在同一生物群体中，同时和经常存在的两种或两种以上的基因型，这些基因型不能因重复突变来维持，一般以每种基因频率超过1%，才能称为多态。如不超过1%，则称为遗传变异体。 人类存在多种遗传多态现象（多态性），主要有染色体多态性、酶和蛋白质多态性、抗原多态性、DNA多态性五类。 遗传标记(genetic marker)：具有平衡多态性的遗传性状，作为标志用以识别携带他的个体、细胞、染色体或用以研究家系和群体的遗传方式时 ，称为遗传标记。 法医学上的遗传标记主要有两种：血型和DNA遗传标记。 血型(blood group)：血型的概念：血型是人类血液的由遗传控制的个体特征之一，它分为狭义和广义两种。狭义的血型是指红细胞血型，即红细胞膜上抗原的类型；广义的血型除红细胞血型之外，还有白细胞血型、红细胞酶型、血小板血型、血清型等。 红细胞血型除了ABO血型之外，还有 Rh血型（Rh阳性和Rh阴性的区别在于有无D抗原）、MN血型等，到目前为止共有29种。 在80年代以前，法医学的遗传标记采用的是血型。 法医学上DNA分析技术发展历史 法医学上DNA分型技术经历了三代： 1.DNA指纹技术 2.PCR-STR技术 3.PCR-SNP技术 二、DNA的结构和理化性质 （一）DNA的结构 1、DNA分子的基本结构单位 DNA分子的基本结构单位是由一个磷酸分子、一个脱氧核糖分子、一个含氮碱基组成。碱基有四种：A、T、C、G。碱基和脱氧核糖通过糖苷键连成脱氧核糖核苷，核苷与磷酸通过酯键连接构成了脱氧核糖核苷酸。 2、DNA的一级结构 DNA的一级结构是指四种核苷酸(dAMP、dCMP、dGMP、dTMP)按照一定的排列顺序，通过磷酸二酯键连接形成的多核苷酸，由于核苷酸之间的差异仅仅是碱基的不同，故又可称为碱基顺序。 3、 DNA的二级结构 又称为双螺旋结构。特点是： (1)在DNA分子中，两股DNA链围绕一假想的共同轴心形成一右手螺旋结构。 (2)链的骨架由交替出现的、亲水的脱氧核糖基和磷酸基构成，位于双螺旋的外侧。 (3)碱基位于双螺旋的内侧，一股链中的嘌呤碱基与另一股链中位于同一平面的嘧啶碱基之间以氢链相连，称为碱基互补配对或碱基配对，碱基互补配对总是出现于腺嘌呤与胸腺嘧啶之间(A=T)，形成两个氢键；或者出现于鸟嘌呤与胞嘧啶之间(G=C)，形成三个氢键。 (4)DNA双螺旋中的两股链走向是反平行的，一股链是 5′→3′走向，另一股链是3′→5′走向。 4、人的基因组DNA特点 （1）人的基因组DNA是断裂基因，内含子和外显子相互间隔排列。大部分基因含有内含子，因此，基因是不连续的。 （2）存在重复序列，重复次数可达百万次以上。 （3）真核细胞基因转录产物为单顺反子。一个结构基因经过转录和翻译生成一个mRNA分子和一条多肽链。 （4）基因组中不编码的区域多于编码区域。 （5）基因组远远大于原核生物的基因组，具有许多复制起点，而每个复制子的长度较小。 5、人类基因组的重复序列 人类基因组DNA存在大量的重复序列： 按重复的方式分为：串联重复序列、散在重复顺序 倒位重复顺序 。 （1）串联重复序列（VNTR） 又称为卫星DNA ，分为大卫星DNA、中卫星DNA、小卫星DNA、微卫星DNA四种。 （2）其他的重复序列，如ALU家族。 6、DNA的理化性质： (1)DNA变性 DNA变性是指双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，形成单链无规则线团，因而发生性质改变（如粘度下降，沉降速度增加，浮力上升，紫外吸收增加等），称为DNA变性。加热、改变DNA溶液的pH、或受有机溶剂（如乙醇、尿素、甲酰胺及丙酰胺等）等理化因素的影响，均可使DNA变性。 (2)DNA 复性 　 变性DNA只要消除变性条件，二条互补链还可以重新结合，恢复原来的双螺旋结构，这一过程称为复性。通常DNA热变性后，将温度缓慢冷却，并维持在比Tm低25～30℃左右时，变性后的单链DNA即可恢复双螺旋结构，因此，这一过程又叫做退火。 (3)杂交 当不同来源的核酸变性后一起复性时，只要这些核酸分子中含有相同序列的片段，即可形成碱基配对，出现复性现象，形成杂种核酸分子，或称杂化双链，称核酸分子杂交 三、DNA多态性 法医学上应用的DNA多态性分为两类：长度多态性、序列多态性。 长度多态性是指等位基