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HSP90在胃癌中的表达及意义 尚进才刘伟新焦成斌徐剑(佳木斯大学附属第一医院普外科154002) 【中图分类号】R735.2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085 ( 2012 ) 31-0074-03 【摘要】目的探讨热休克蛋白90 (HSP90)在胃癌、癌旁组织、慢性胃炎和正 常胃粘膜组织中的表达情况，及与临床、病理资料之间的关系。方法 采用组织 芯片技术、免疫组织化学方法检测病理诊断明确的60例胃癌标木及距胃癌边缘 1.5cM处的癌旁组织、距胃癌边缘5cM以上的正常组织及胃炎组织中HSP90的 表达差异，结合临床病理资料进行统计分析。结果hSP90的表达：在60例胃癌 中的阳性率为71.7%,明显高于癌旁组织(plt;0.01)胃炎组织(plt;0.01)和 正常组织(plt;0.01)； HSP90的表达与病人年龄、性别、肿瘤组织类型和浸润 胃壁深度无明显相关性(Pgt；0.05)；与肿瘤分化程度、远处转移和临床病理分 期具有相关性(Plt;0.05)o结论胃癌中HSP90的表达明显高于癌旁组织、胃炎 组织和正常组织，提示与胃癌发牛、发展密切相关；而且与病人年龄、性别、肿 瘤组织类型和浸润胃壁深度无明显相关性「与肿瘤分化程度、远处转移和临床病 理分期具有相关性。 【关键词】胃癌HSP90免疫组化 组织芯片 热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是细胞在环境和功能状态改变时 产牛的一类糖蛋白。实验证实HSP在某些肿瘤组织中的表达与在正常组织中的表 达不同［1,2］,如在卵巢癌中的表达与其临床病理分期和术后牛存有关［3］,证实其 是存在于肿瘤与正常组织间的一种差异蛋白［4］。本文使用组织芯片技术、免疫 组织化学方法研究HSP90在胃癌、癌旁组织、胃炎组织和正常组织中的表达， 探讨其在胃癌中的表达及与临床病理学特征的关系，为胃癌的发展和预后提供理 论依据。 1材料与方法 1.1标木来源组织芯片标木为佳木斯大学附属第一医院经外科手术切 除、术后有病理诊断支持的胃腺癌组织、距胃癌边缘1.5CM处的组织、距胃癌边 缘5cM以上的正常组织及胃炎组织标本60例，用组织芯片制作仪打孔，制作芯 片。在手术前所有患者均未接受任何抗癌治疗，男性43例，女性17例。本组患 者的平均年龄是60plusmn;12岁（中位年龄是60.5岁,33-81岁）。根据Lauen 分类法（1965年）将肿瘤分类:60例中，肠型20例，弥漫型40例。按照肿瘤 的分化分三类：高分化4例，中分化10例，低分化46例。根据国际抗癌联盟 （UICC）1987年公布的胃癌TNM分期法将肿瘤分期:I期口例，II期19例，III 期20例，IV期10例。17例阳性患者淋巴结阴性,43例阳性患者淋巴结阳性（N1, 27例；N2, 16例）。在检查的60例中有3例远处转移。所有标本经10%福尔马 林固定，常规石蜡包埋，4uM厚切片。 1.2方法 1.2.1制作组织芯片 先进行HE染色切片、病理诊断，标记肿瘤组织范 围。新鲜胃癌标本在石蜡处理后，依据实验的目的来设计组织芯片阵列的组织类 型和排列方式；选择恰当的病例编号；按照病例编号把组织蜡块和相应的HE染 色切片从组织库中取出；制做合适的空片受体蜡块，用组织包埋机来完成；依据 阵列设计取出病理蜡块组织芯并规律地排列在空白受体蜡块上，用组织阵列仪来 完成；将阵列块放在52°C的恒温箱中加热融合，这样组织芯和受体蜡块二者密 切相连；对阵列块进行蜡块修整，使用直径1MM的打孔针，在全自动组织切片 机上以20mu;M/Min的进刀速度进行，最后达到80%的组织芯完全暴露。阵列 块切片，在全自动组织切片机上以4mu;M/Min的进刀速度进行；在经过防脱 片处理的载玻片上，裱附切片；将阵列切片放在60°C恒温烤箱中加热16h；按照 编号，每隔10张组织芯片抽取一张进行HE染色；对抽检组织芯片中的每一个 组织样本进行复诊质检；组织芯片实验白片保存于切片盒中，置于5°C冰箱保存; 对使用过的病理组织蜡块进行封腊，并将其和对应的HE染色切片归位放冋蜡块 柜和切片盒中。 1.2.2免疫组织化学染色ElivisionTMplus试剂盒将多个抗鼠和抗兔IgG 分子与辣根过氧化物酶聚合，所形成的聚合物直接与一抗结合，从而放人了抗原 抗体结合的信号。其染色步骤如下：（1）芯片脱蜡和水化。（2）根据每种抗体 的要求，对组织抗原进行柠檬酸修复液（PH值，6.0）热修复20分钟。（3）每 张切片加1滴或50mu;l 3%过氧化氢溶液，室温下孵育10分钟，以阻断内源性 过氧化物酶。PBS冲洗3times;3 。（4）甩去PBS液，每张切片加1滴或50mu;l 的第一抗体，室温下孵育60分钟或4°C过夜。（5） PBS冲洗3times;