利用合成调控RNA技术提高大肠杆菌异源合成红霉.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 宋书杰 等/利用合成调控RNA 技术提高大肠杆菌异源合成红霉素前体 6-脱氧红霉内酯B 产量 1039 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn July 25, 2015, 31(7): 1039−1049 DOI: 10.13345/j.cjb.140619 ©2015 Chin J Biotech, All rights reserved 研究报告 利用合成调控RNA 技术提高大肠杆菌异源合成红霉 素前体6-脱氧红霉内酯B 产量 1,2* 1* 1 宋书杰 ，熊智强 ，王勇 1 中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所 合成生物学重点实验室，上海 200032 2 上海海洋大学 食品学院海洋药物教研室，上海 200306 宋书杰, 熊智强, 王勇. 利用合成调控RNA 技术提高大肠杆菌异源合成红霉素前体6-脱氧红霉内酯B 产量. 生物工程 学报, 2015, 31(7): 1039–1049. Song SJ, Xiong ZQ, Wang Y. Enhancing erythromycin precursor 6-dEB production by using synthetic small regulatory RNAs in Escherichia coli . Chin J Biotech, 2015, 31(7): 1039–1049. 摘 要: 红霉素为代表的聚酮类化合物已经成功的在大肠杆菌中实现了异源合成，但其产量仍然较低 ( 仅 ~10 mg/L) 。本研究基于大肠杆菌全基因组代谢模型iAF1260 ，利用通量平衡分析预测了红霉素母核6-脱氧红 霉内酯 (6-Deoxyerythronolide B, 6-dEB) 生物合成的关键靶点，通过合成调控 RNA 技术 (Synthetic small regulatory RNAs, sRNAs) 对预测的靶点进行验证。结果表明，以弱化lsrC (编码LsrABC 转运蛋白) 和ackA (编 码乙酸激酶蛋白) 为代表的关键靶点改造可以显著提高6-dEB 异源合成，提高幅度可达48.7% 。通过弱化靶点 的组合，进一步改善了6-dEB 的异源合成，产量最终可达22.8 mg/L ，比出发菌株产量提高59.9%。本研究发 现和确认了 6 个有效的调控靶点，最终成功地改善了 6-dEB 在大肠杆菌中的异源合成。研究表明，通量分布 比较分析结合sRNAs 技术是一种有效的方法提高 6-dEB 异源合成，也为改善其他代谢产物的异源合成提供了 可供借鉴的研究思路。 关键词: 大肠杆菌，6-脱氧红霉内酯，异源合成，全基因组代谢模型，sRNA 技术 Received: December 15, 2014; Accepted: January 30, 2015 Supported by: National High Technology Research and Development Program of China (863 Program) (No. 2012AA02A701), National Basic Research and Development Program of China (973 Program) (No. 2012CB721104), National Natural Science Foundation of China (No.. Corresponding author: Yong Wang. Tel/Fax: +86-21; E-mail: yongwang@ * These authors contributed equally to