固定化酶微升反应器与MALDI-TOFMS联用技术用于蛋白质肽谱研究.PDF

固固定定化化酶酶微微升升反反应应器器与与MALDI-TOF MS联联用用技技术术用用于于蛋蛋白白质质肽肽谱谱研研究究* Citation: 中国科学B辑: 化学 30, 385 (2000); doi: 10.1360/zb2000-30-5-385 View online: htt :///doi/10.1360/zb2000-30-5-385 View Table of Contents: htt :/// ublisher/sc /journal/SSPC-B2/30/5 Published by the 《中国科学》杂志 Articles you may be interested in 基于质谱技术的计算蛋白质组学研究 Science in China Series F-Information Sciences (in Chinese) 36, 222 (2006); 应用核磁共振波谱技术研究蛋白质相互作用 Chinese Science Bulletin 5 , 1017 (2009); 蛋白质组技术的研究进展 Chinese Science Bulletin , 904 (1999); 色谱技术分离蛋白酶解和蛋白/多肽的研究进展 SCIENTIA SINICA Chimica 0, 585 (2010); A lication of Selected Reaction Monitoring in Proteomics Research SCIENTIA SINICA Vitae 3, 63 (2013); ( B 辑) 第30 卷 第5 期 SCIENCE IN CHINA ( Series B ) 2000 年 10 月 固定化酶微升反应器与MALDI-TOF MS联用 技术用于蛋白质肽谱研究* 姜泓海 邹汉法 汪海林 张 强 倪坚毅 张清春 郭 忠 陈小明 (中国科学院大连化学物理研究所,国家色谱研究分析中心,大连 116011) 摘要 以甲基丙烯酸缩水甘油酯新型复合纤维素膜为介质固定化胰蛋白酶,与传 统微球固定化酶反应器相比,提高了分子扩散传质性能.设计并制成固定化酶微升反 应器,并与基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)联用应用于蛋白质的 肽谱分析.将所获得的肽质谱图用于蛋白质数据库检索,可以确定各肽段在蛋白质中 的位置.这种方法尤其适用于高灵敏度和微量生物样品的快速分析,可以在皮摩尔的 水平上对蛋白质的结构进行鉴定. 关键词 固定化酶 微升反应器 基体辅助激光解吸电离 飞行时间质谱 肽谱 传统的质谱方法是测定微量小分子量化合物结构最灵敏 最重要的手段之一, 然而生物 大分子大多为极性和难以挥发的化合物, 不易气化且具有热不稳定性. 随着化学生物学的发 展, 迫切需要一种新的质谱电离手段, 使之能够对生物大分子进行检测和鉴定. 正是由于生 命中的化学研究发展的需要, 导致了基体辅助激光解吸电离(MALDI) [1~4]等软电离技术的出 现. 由于基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry, MALDI -TOF MS)具有高准确性 高分子量检测能力(大于 1 000 000 ) 高检测灵敏度和对离子 缓冲溶液较强的忍耐性及其可对混合物的直接分析, [5~9] 在生物化学 临床医学和高分子聚合物的研究中得到飞速的发展和广泛的