Neuregulin-1β对大鼠脑缺血再灌注后GAP-43表达与神经功能的影响.pdfVIP

引言 脑卒中的发病率、致残率、死亡率都很高，在我国部分地区甚至列为首位， 在脑卒中的发病人群中，70％～80％的卒中患者为缺血性脑卒中。脑卒中对老年 人更是重要的死亡或致残原因，在世界与我国人口老龄化趋势日益加速的情况 下，脑卒中的危害性亦必然日益突出。脑缺血可导致严重的迟发性神经元损伤， 影响患者的愈后和功能的恢复，脑梗塞后，该血管支配区内的神经细胞缺血、缺 氧并逐渐发生细胞坏死和凋亡。随着溶栓法在临床治疗急性脑卒的广泛应用，脑 缺血再灌注损伤受到人们关注。缺血再灌注损伤的病理过程包括：脂质过氧化导 致血脑脊液屏障破环；白细胞释放蛋白酶、炎症介质和活性氧；易损组织释放兴 奋性氨基酸底递质多，使钙通道开放，引起钙超载，导致神经元死亡。 cerebral 临床缺血性脑病的多发部位为大脑中动脉(middleartery，MCA)， 其作为颈内动脉的终末支，发出供应顶支、额支、颞支前部的绝大部分半球皮层 结构及深部脑白质。覆盖在大脑半球表面的一层灰质称为大脑皮层，是神经元胞 体集中的地方。大脑中动脉闭塞再灌注后，杏仁核局部血流比尾壳核低，纹状体 局部血流比皮质低。杏仁核的神经元损害较严重，细胞死亡以肿胀性死亡为主； 皮质神经元损害较轻，细胞死亡以凋亡为主。形态学研究发现，脑缺血半暗带神 经元死亡以凋亡为主，随着时间的延长半暗带内胶质细胞等非神经元细胞也将死 亡，半暗带就发展为梗死区的一部分。这说明凋亡参与了脑缺血再灌注后神经损 伤的形成和发展。如果能够阻止凋亡的发展，就有可能减轻脑缺血再灌注后脑损 伤程度，缩小梗死范围。 神经调节蛋白是一个由四种基囚编码的多肽家族，由NRG．1基因编码产物 经选择性剪接后形成，包括四种异构体NRG．1，2，3，4【¨。尽管功能不同，但 factor,EGF)样结构域。 都具有激活受体所必需的表皮生长因子(epidermalgrowth 由于NRGs是从不同的生物体，包括细胞分化、增殖、存活和迁移实验中分离纯 化和克隆得到的，所以有许多不同的名称【2】。NRG之间有较大的结构差异，但 都含有相似的结构域，包括Ig样环状结构(100p)、EGF样结构域、跨膜区和长 度不等的胞内区结构域【3】o各类剪接体的EGF样结构域，足以介导与其受体ErbB 的结合，并启动一系列生理效应。 5 (EGFR)家族成员。ErbB酪氨酸激酶受体的结构包括胞外结合区结构域(含有两个 保守的半胱氨酸富集区)、跨膜结构域、酪氨酸激酶结构域以及C．末端结构域。 酶一样，ErbB受体能够催化多肽链中的酪氨酸磷酸化，从而激活下游信号分子【61。 得酪氨酸自身磷酸化r71。 对脑组织内DNA碎片的分析提示，NRG．1能够阻止缺血半暗带内皮质神经 元的凋亡【8-9】。NRG．1还能够防止局灶性脑缺血后巨噬细胞／,b胶质细胞的浸润以 13 及星形胶质细胞的活化。NRG．1的神经保护作用与IL．1mRNA的抑制有关【lo】【 11】【12】；此外，NRG．1信号也有保护脑微血管内皮细胞的作用【13】。 急性期神经细胞保护干预、促进脑缺血损伤后神经细胞功能恢复及再生仍是 目前研究重点。Neuregulin．1fl作为神经保护因子在促进大鼠脑缺血再灌注后脑灰 质轴突再生作用方面鲜有报道。 生长相关蛋白(GAP．43)作为神经损伤和修复的标志物n钔，通过检测GAP．43 水平，可以反映NRG．1对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经再生情况与神经保护作 用，进而探讨NRG．1的作用机制及其临床运用价值。 本实验，大鼠右侧脑室先注射NRG．1p(2．5ng／kg)干预治疗，建立大脑中 动脉缺血再灌注动物模型，分别于MCAO／R后ld，3d和7d进行神经功能学评 分：斜板实验：测大鼠随意运动功能；HE染色和透视电镜观察脑灰质病理学病 变；免疫组织化学染色观察GAP一43阳性产物的表达和分布及RT-PCR法观察 GAP．43mRNA的表达。研究NRG．1D对大鼠脑缺血再灌注后脑灰质的保护作用 及其可能的机制，并进一步探讨其临床应用的潜在价值，特别是促进轴突再生， 神经功能恢复的作用。